Propuesta

La sangre es un tejido orgánico en forma de líquido viscoso, de color rojizo, e integrado por elementos celulares libres (células sanguíneas) y por una sustancia fundamental líquida (plasma). De las células sanguíneas las que nos interesan son los eritrocitos, células anucleadas en forma de disco circular bicóncavo y superficie lisa, que contienen un 33% de hemoglobina. CITA1

Los eritrocitosse suspenden en un medio isotónico dentro del organismo, es decir que no existe movimiento neto del agua por las membranas celulares y por lo tanto se encuentran en un medio en equilibrio. Un cambio en las concentraciones de soluto en el medio, produce grandes cambios de hemólisis de estas células, la cual se observa claramente al salir la hemoglobina que está presente en los eritrocitos. CITA3La hemoglobina es la molécula encargada de transportar el oxígeno a cada una de las células del organismo, por lo que juega un papel vital en el aspecto más importante del metabolismo, ya que los mecanismos más eficientes para generar energía en las células animales, requieren oxígeno molecular para la oxidación de los alimentos. También transporta una parte del CO2 producido en los tejidoshasta los pulmones. CITA1



La hemoglobina es una proteína, con un peso molecular de 66.000 d. Está formada por 4 cadenas polipeptídicas, cada una unida a un grupo hemo. Éste está formado por una porfirina unida a Fe que puede estar en forma oxidada (Fe3+) o en forma reducida (Fe2+). CITA1

Imagen 1: Hemoglobina Oxigenada.

La forma reducida es la única capaz de unirse al O2 y sedenomina oxihemoglobina cuando está unida al O2 (de color rojo vivo, es la que se encuentra en la sangre arterial). La sangre venosa (rojo oscuro) contiene bastante desoxihemoglobina, que no contiene oxígeno y sí CO2 unido como carbamino-Hb. El átomo de hierro del grupo hemo se mantiene en todas estas formas en su forma reducida Fe2+ Si se oxida a Fe3+ es incapaz de unirse al O2 ni al CO2 y sedenomina metahemoglobina (de color pardo). CITA1 Su reacción con el oxígeno es acompaña de la modificación estructural. CITA2

Para extraer la hemoglobina es necesario separar el plasma de la sangre de los glóbulos rojos. Al centrifugar la sangre se separan los eritrocitos del suero que tiene proteínas y otros compuestos disueltos. Se debe utilizar un anticoagulante, ya que sin el los eritrocitosprecipitarían coagulándose y dificultando la extracción de la hemoglobina de ellos. CITA2

El tolueno es un compuesto orgánico no polar en el que los lípidos de la membrana celular de los eritrocitos son solubles. Con la agitación en el balón de extracción se promueve la lisis de los glóbulos rojos al mezclarse el tolueno con las membranas celulares, liberando de esta manera la hemoglobina. CITA2La hemoglobina es soluble en agua, por lo que queda en solución en la fase acuosa. La solución obtenida es la oxihemoglobina.

Para la preparación de deoxihemoglobina, se usa el reactivo de Stockes que consiste en sulfato de hierro heptahidratado y ácido tartárico con hidróxido de amonio. El protón derivado del ácido tartárico se une a lugares específicos de la molécula de hemoglobina dondehayan grupos amino libres disminuyendo así la afinidad de la molécula de hemoglobina por el oxígeno. De esta manera la oxihemoglobina pierde sus moléculas de oxígeno y da lugar a la deoxihemoglobina. CITA2

La metahemoglobina se produce por la reacción de la hemoglobina en presencia de ciertos agentes químicos u orgánicos. El ferricianato de potasio oxida al hierro de la oxihemoglobinacambiando su valencia de +2 a +3. Así ya no tiene la misma afinidad que tenía por el oxígeno por lo que éste se libera. La nitrosilhemoglobina se forma por la reacción de la oxihemoglobina con óxido nítrico, producido in vitro con el nitrito de sodio y el ácido ascórbico. CITA2

Las distintas formas de Hb se distinguen por sus espectros de absorción, aunque todas absorben mucho entre 480 y 660...