Propuesta

Universidad del Sagrado Corazón
Departamento de Ciencias Naturales
Programa de química
QUI 202

















Estudio comparativo e identificación de las proteínas del virus Ébola, la influenza H1N1 y el cólera por medio de HPLC-MALDI TOF MS















Nicole Méndez Meléndez
200-90-2673
4 de diciembre de 2013
Índice
Página


1. Trasfondoteórico 2 - 11
2. Propósito 12
3. Procedimiento experimental 13 - 18
4. Problemas anticipados y solución 19
5. Resultados esperados 20 - 21
6. Presupuesto 22 - 23
7. Referencias 24 - 25













I Trasfondo teórico

La técnica de MALDI-TOF ha sido un éxito en obtener medidas de masa confiables. El MALDI-TOF MS es una buena herramienta paraproyectar masas de péptidos. Este método es muy efectivo porque requiere menos preparación de una muestra intensa ya que la matriz es menos susceptible a las interfaces que causan las sales y detergentes. MALDI-TOF-MS genera péptidos que contiene una sola carga y muestra solo un pico en el espectro, esto facilita la interpretación de la data obtenida.
Los péptidos y las proteínas han sidocaracterizados por HPLC creando mapas de péptidos que han sido usados como huellas de proteínas o como una herramienta de pureza de alguna proteína conocida en una muestra conocida. La espectrometría de masa refleja un mapa de las proteínas que puede ser usado para buscar una secuencia en una base de datos para encontrar alguna otra secuencia que paree con la obtenida. Mientras más confiables sean lasmasas de los péptidos, hay menos probabilidad de que haya un mal apareamiento.
También en la espectrofotometría de masa en MALDI-TOF, las proteínas y los péptidos se mezclan con una matriz que usualmente se compone de un ácido orgánico aromático que dona un protón al analito y se seca en una placa de muestra de metal. Luego de que la placa es puesto en un vacío elevado en su cámara en elespectrómetro de masa, una pequeña porción de la muestra es vaporizada por un láser corto de nitrógeno gaseoso de aproximadamente 237nm para la ionización de las moléculas. Los iones suben por el tubo hasta el analizador de masa y sus masas son determinadas por su tiempo de vuelo. El rango de medidas usando MALDI es de 100 kDa pero se pueden detectar moléculas intactas de hasta 10⁻⁶Da. El límite másbajo y práctico que se utiliza son unos cientos de daltons ya que es considerable la interferencia en este rango del espectro de la matriz y otros contaminantes con una cantidad de masa pequeña. En esta investigación se intenta analizar tres diferentes enfermedades que son letales para humanos y otros animales. Estas enfermedades pandémicas son causadas por virus y bacterias. La técnica ideal parael estudio de las proteínas del virus Ébola, la influenza H1N1 y el cólera en esta investigación lo es el método de HPLC-MALDI TOF MS.
Uno de los pasos de la entrada de un virus es cuando éste se une y entra a la célula de un organismo susceptible. Los virus son muy pequeños para reproducirse por sí solos, por eso es que invaden una célula huésped para multiplicarse y hacer millones de copias asíinfectando otros organismos.
Algunos virus necesitan una proteína específica u otro tipo de molécula en la superficie de la célula huésped llamado receptor, si lo reconoce éste permite que el virus entre. Si no lo reconoce, el virus no puede entrar así impidiendo infección al organismo. Esta información es útil para científicos porque deja saber cuáles organismos o células son susceptibles a lainfección de un virus.
El virus ébola es causante de una fiebre hemorrágica que puede ser letal para los humanos y primates. Ébola produce una de las formas más peligrosas de las fiebres hemorrágicas. Algunos de los síntomas que causa este virus los son la fiebre, dolor de cabeza, vómitos, diarreas y debilidad. En casos severos se ven afectados los vasos sanguíneos y sangrado externo e...