Proteínas: Extracción Y Cuantificación De La Caseína De La Leche

ÍndiceProteínas: Extracción y cuantificación de la caseína de la leche

Pág. 3…………………………………………………...Objetivos
Pág. 4-8…………………………………………………Resultados y discusión
Pág.9……………………………………………………Conclusión
Pág. 10………………………………………………….Bibliografía














OBJETIVOS


• Realizar de manera experimental la extracción de la proteína (caseína)

• Cuantificar la concentración deproteína por el método de biuret




















RESULTADOS Y DISCUSION

a) Nombre los materiales que se ocuparán en este trabajo práctico. ¿Qué función cumple cada uno de ellos?

Leche semidescremada: es la muestra a prueba que se diluirá y apartir de esta se extraerá, purificara y cuantificara la caseína (proteina).
Vaso precipitado: donde se deposita la leche yadisuelta y se le agrega el HCL hasta llegar al punto isoeléctrico de la caseína, para posteriormente hacer lavados, centrifugados y todos los demás pasos que quedan en los tubos de ensayos que son mas prácticos para el experimento.
HCL: este reactivo se utilizo para, poder llevar al punto isoeléctrico a la proteína especifica en estudio .mediante una baja de pH , ya que este es un acido fuerte contraun acido débil como el pH de la leche.
PHmetro: mide el pH, para llegar al punto isoeléctrico especifico para la caseína.
Tubos de ensayos: es en estos tubos donde, se centrifuga, lava, resuspende (extracción y purificación de la caseína) y se le aplica el biuret para la cuantificación de la caseína.
Agua destilada: esta juega un papel importante en la dilución de la muestra (lechesemidescremada) y la resuspensión, ya que esto provoca la purificación de caseína mediante el lavado.
Centrifugadora: la cual centrifugó las muestras para que la caseína precipitara por efecto de la fuerza centrifuga y se eliminara el sobrenadante.
Etanol: si bien interactúa mas con la caseína, este limpia y desecha lo que no sea caseína, además de dejarla preparada para el NaOH
NaOH: este reactivo provocala resuspensión de la caseína y homogenización debido a que la vuelve un acido aun mas débil pasando a una base débil, permitiéndole la interacción, dejándola en un medio básico apto para poder agregarle el reactivo biuret que solo reaccionara en este.
Biuret: tiene sulfato de cobre alcalino que reaccionaran con los átomos de nitrógeno peptídico con los iones Cu++ , que como producto quedara uncomplejo color purpura el cual es necesario para la cuantificación de la caseína.
Espectrofotómetro: esto medirá la absorbancia de las muestras, gracias al complejo purpura, que de la intensidad de color de este dependerá la absorbancia(las ondas de luz que retiene las muestras)


Condiciones iniciales:
Mida el pH inicial de su muestra de leche. ¿Qué reactivo debe añadir a la muestra paraque su pH final sea 4,6?



pH (leche) inicial = _6,6___ llevar a pH (final) = 4,6.

Se le debe añadir HCL, el cual es un acido fuerte, por ende si la leche tiene un pH de acido débil(6,6). Esta tendera a bajar y volverse más acido. Hasta llegar al punto isoeléctrico necesario para la caseína.(lo cual se va midiendo con pHmetro para llegar al punto exacto)

Discusión:

b) Observe sumuestra, indique qué cambios se observan a medida que el pH va disminuyendo.

Comienza haber una separación, la leche la cual era homogénea, pierde densidad y se van formando aglomeraciones blancas, que van precipitando en un medio de color azul muy tenue.
Esto es producido porque la proteína especifica escogida (caseína) precipito, eso eran las aglomeraciones blancas y como esta son las queestán en mayor cantidad, se noto de inmediato su precipitación por que al agregarle HCL disminuimos su pH llevándola al punto isoeléctrico especifico para la caseína, donde las proteínas quedan con carga cero, dejan de tener interacción con el medio, se tienden a agrupar y precipitar



a) Su muestra de leche será sometida a los siguientes pasos, centrifugación, lavados y resuspensión....