Proteínas Por Bradford

DETERMINACION DE PROTEINAS: METODO DE BRADFORD INTRODUCCION Existen varios métodos para determinar la concentración de proteínas de una muestra, tales como la determinación de la absorbancia a 280nm, o mediante la formación de derivados coloreados de las proteínas, base de los métodos de BIURET o de LOWRY. En estos casos se forma un complejo coloreado de cobre con el enlace peptídico; en elmétodo de Lowry, además del complejo anterior también se forma un derivado de las tirosinas que contribuye a la absorbancia total.

El método que vamos a utilizar durante estas prácticas se basa en unprincipio diferente: se emplea un colorante hidrofóbico cuyas disoluciones acuosas en presencia de ac. fosfórico tienen un color pardo y que, al encontrarse en el entorno hidrofóbico del interior de unaproteína, origina un color azul intenso que se puede medir fácilmente. Este método depende, pues de la interacción relativamente inespecífica entre un colorante hidrofóbico y las proteínas, por loque es relativamente sensible a la presencia de contaminantes tales como restos de detergente y líquidos orgánicos como el metanol. Su principal ventaja es que resulta más rápido y fácil de emplear queotros métodos alternativos, y más sensible que la medida de absorbancia a 280 nm. Para determinar la concentración de proteína total presente en una muestra se requiere la preparación de una curva decalibrado empleando una proteína patrón, que generalmente suele ser la seroalbúmina bovina.

OBJETIVO Determinar la concentración de proteínas de leche de vaca desnatada. MATERIAL 1- Reactivo deBradford (“Muy importante”. No confundir el coomasie G250 con el coomasie R-250). Azul de coomasie G-250 Etanol Ac. fosfórico agua 5 mg 2.5 ml 5 ml Hasta 50 ml

Mezclar en el orden indicado, disolvercon agitación y a continuación filtrar. 2- Patrón de albúmina. Disolver 10 mg de albúmina bovina en 10 ml de agua destilada, con lo que tenemos una disolución madre con una concentración de 1...