Proteínas totales.

Introducción:
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en la naturaleza y esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte yaparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc.
Una manera de evaluar la eficiencia de los métodos de extracción de proteínas es determinando el contenido deproteína solubles que se obtienen después de la etapa de extracción.
Fundamento:
Las moléculas de proteínas contiene un gran número de péptidos unidos. Cuando se tratan con iones de cobre (Cu2+) ensolución alcalina, se forma un complejo coloreado entre el cobre y los grupos amino/carbonil de estos péptidos. Una reacción igual ocurre con el Biuret (compuestos más simples formados por elcalentamiento de la urea). Así fue adoptado el término de “Reacción de Biuret”.
El color violeta desarrollado es directamente proporcional al numero de enlaces peptídicos de las proteínas e independiente de laconcentración relativa de albumina y globulina.
Material:
Vacutainer
Gradilla.
Tubos de ensayo.
Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
Baño de agua a 37°C
Reloj.
Reactivos:Reactivo de proteínas totales (solución de sulfato de cobre pentahidratado 0.3g/dL, en solución de hidróxido de sodio 0.8g/dL. También contiene ioduro de potasio y tartrato de sodio y potasio).Estandar de proteínas totales 10 g/dL. (solución acuosa de albumina bovina fracción V, con azida de sodio como preservativo).
Equipo:
Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
centrifuga
Tubos deFotocolorímetro o cubetas espectrofotométricas.
Procedimiento:
1. Pipetear en las cubetas espectrofotométricas los siguientes volúmenes (mL) y mezcle bien.

Blanco
Estándar
Muestra
Reactivo
2ml
2ml2ml
Estándar

20µl
NO
Suero


20µl

2. Esperar 10 min. con los tubos a temperatura ambiente.
3. Llevar a cero el espectrofotómetro a 500-505 nm con el reactivo.
4. Leer el estándar y la...