proteinas de fusion

Páginas: 2 (465 palabras) Publicado: 19 de octubre de 2015
Proteínas de fusión
• 2 problemas principales con la
expresión de proteínas foráneas
– Degradación
– Purificación

Proteínas de fusión
• Degradación
– produce un nivel bajo de expresión
– esdificil la purificación de la proteína
deseada

• Una solución para la degradación
– Unir la proteína target a una proteína
celular estable (tag o carrier)

Proteínas de fusión
• Proteína de fusión (anivel DNA o genes)
– Región que codifica una proteína celular
fusionada en marco de lectura a la región que
codifica para la proteína target
– Cuando se transcribe y traduce genera una
proteína defusión

Proteínas de fusión
Carrier o tag
• en el extremo -NH2 o –COOH de la proteína
- un dominio con actividad catalítica
- un dominio antigénico
- una señal peptídica topogénica
• protege deproteólisis a la proteína de interés
• mejora la solubilidad de la proteína
• estabiliza a la proteína de interés

Proteínas de fusión
stable gene

gene of interest

MET ... LEU ARG THR MET VAL ILE ... EndATG ... GTG CGA ACC ATG GTG ATC ... TAG
Nco I
Note: translation stop of cellular gene must be removed
Note: reading frame of fusion protein must be contiguous

Proteínas de fusión
• Clivado porproteasas
– Clivan una corta y definida secuencia de
aa
– La secuencia de clivado para la proteasa
entre el gen carrier y el gen de interés
protease cleavage sequence

fusion partner

gene of interest Sitio de clivado para el Factor Xa

Purificación de proteínas de
fusión
• La proteína de fusión se une a una
molécula pequeña o anticuerpo (Ab)
• La molécula pequeña o Ab pueden
estar unidos a unamatriz inerte
• La proteína de fusión se unirá, las otras
no
• La proteína purificada se eluirá de la
columna

Purificación por cromatografía de afinidad
3
1

2

4

Proteínas de fusión
• A veces lasobreexpresión puede
reducir la cantidad de proteína
recuperada
– La proteína forma agregados insolubles:

Cuerpos de inclusión
– La formación de agregados puede deberse
a un plegamiento incorrecto...
Leer documento completo

Regístrate para leer el documento completo.

Estos documentos también te pueden resultar útiles

  • Fusion
  • FUSION
  • Fusion
  • fusion
  • Fusion
  • FUSION
  • Fusion
  • Fusionando

Conviértase en miembro formal de Buenas Tareas

INSCRÍBETE - ES GRATIS