Proteinas

| INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICASINGENIERÍA BIOQUÍMICADEP. DE BIOQUÍMICAMÉTODOS DE ANÁLISIS“SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENCIONAL EN CAPA FINA” Prof.: JOAQUIN CORDEROVÁZQUEZ HUERTA MARÍA ANGÉLICA | |

INTRODUCCIÓN
La cromatografía en capa fina es una técnica instrumental que ha adquirido granimportancia para análisis de productos de interés, ya que reúne las ventajas de la cromatografía en papel, y algunas de las de la cromatografía líquida en columna. La disposición experimental es muy similar a la de la primera con la diferencia de que el papel, como soporte de la fase estacionaria, ha sido sustituido por una fina capa de un material adsorbente tal como el gel de sílice (SiO2), la alúmina(Al2O3) o el óxido de magnesio (MgO).
La cromatografía en capa delgada o capa fina (TLC) ("Thin Layer Chromatography"), en la que el soporte de la fase estacionaria es un material poroso purulento extendido sobre una superficie de vidrio, plástico o metal, por el que fluye, por capilaridad, la fase móvil; el material poroso puede también actuar como fase estacionaria en la cromatografía deadsorción.
La cromatografía de capa fina, en la separación de sustancias lipófilas, es mucho más ventajosa que la cromatografía de papel. Se empleó este método también, unos años más tarde para la separación de combinaciones hidrófilas y en algunos casos fue comparado sistemáticamente con la cromatografía de papel, demostrándose que empleando sustancias apropiadas, es tan buena o mejor que aquella.Las ventajas más importantes de la cromatografía de capa fina son:
Excelente nitidez.
Alta sensibilidad.
Gran rapidez.
Cromatografía Bidimensional
Si los componentes de una mezcla de sustancias no se pueden separar completamente en una dirección de desplazamiento, se procura separarlos mediante esta técnica.
La solución a analizar se aplica sobre el cromatofolio en un punto de ladiagonal de la placa, a una distancia de 2 ó 3 cm de un ángulo y se cromatografía primero con el eluyente 1 en la dirección 1. A continuación se saca la placa de la cámara separadora y se seca. Las sustancias están separadas parcialmente y se encuentran en una línea próxima y paralela a un borde de la placa. Entonces se coloca la placa en un segundo eluyente diferente al primero, que asciendeperpendicularmente a la primera dirección, separándose los componentes no separados en la primera dirección de desplazamiento.
Cuando se quiera comprobar cantidades muy pequeñas de sustancias, debe tenerse en cuenta que el límite inferior de comprobación sobre un cromatograma bidimensional es mayor en comparación con el unidimensional, ya que al ser mayor el tiempo de desplazamiento en la técnicabidimensional, los efectos de difusión ocasionan una dilución considerable de la sustancia.
Una enorme ventaja es que en le técnica bidimensional pueden combinarse dos procedimientos de separación distintos (por ejemplo, cromatografía de adsorción y de reparto o cromatografía de reparto y electroforesis).

OBJETIVOS
* Separar los aminoácidos presentes en el jugo de kiwi por cromatografíabidimensional en capa fina.
* Identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos.
* Comparar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con la de la unidimensional.

RESULTADOS
Aminoácido | 1ª fase móvil | 2ª fase móvil |
| Frente del soluto (cm) | Frente del disolvente (cm) | Rf (orden creciente) |Frente del soluto (cm) | Frente del disolvente (cm) | Rf |
Arginina | 1.2 | 8.3 | 0.1446 | 5.3 | 8.0 | 0.6625 |
Lisina | 2.0 | 8.3 | 0.2410 | 0.0 | 8.0 | 0.0 |
Glutámico | 2.6 | 8.35 | 0.3114 | 0.0 | 8.0 | 0.0 |
Glicina | 3.4 | 8.35 | 0.4072 | 2.1 | 8.0 | 0.2625 |
Prolina | 3.65 | 8.3 | 0.4398 | 3.3 | 8.0 | 0.4125 |
Treonina | 4.0 | 8.3 | 0.4819 | 5.0 | 8.0 | 0.625 |
Histidina...