Proteinas

Separación de proteínas
La enorme complejidad (varios miles de proteínas diferentes) del proteoma de la mayor parte de los organismos vivos obliga al empleo de diversastécnicas para separar las proteínas. Entre las técnicas más comunes se encuentran la electroforesis mono y bidimensional así como la cromatografía líquida en susdistintas variantes.
La técnica más extendida es la electroforesis en geles de poliacrilamida (llamada SDS-PAGE por sus siglas en inglés "Sodium Dodecyl Sulfate PolyAcrylamideGel Electrophoresis"). Se trata de una electroforesis en gel de poliacrilamida al que se le añade el detergente dodecilsulfato sódico con el fin de desnaturalizar lasproteínas, asegurar que todas se encuentren cargadas y por tanto puedan migrar en un campo eléctrico en función de su masa molecular relativa (Mr). Una variante de este tipode electroforesis es la electroforesis bidimensional o 2D-PAGE, en la que el fraccionamiento en geles SDS-PAGE es precedido por una separación basada en el puntoisoeléctrico de las proteínas. La electroforesis 2D-PAGE permite alcanzar una mayor resolución y es por tanto utilizada en el análisis de proteomas muy complejos. Una vezrealizado el fraccionamiento, distintos métodos de tinción (Azul Coomassie, tinción de plata, tinción Sypro Rubi, etc) permiten visualizar las proteínas separadas. Lacromatografía líquida también se emplea en el fraccionamiento y separación de proteomas complejos. Las distintas variantes existentes permiten separar las proteínas en función desu hidrofobicidad (cromatografía de fase reversa), carga eléctrica (cromatografía de intercambio catiónico/aniónico) y tamaño (cromatografía de exclusión molecular)