Proteinas

ESOECTROFOTOMETRIA
INTRODUCCIÓN:
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permitecomparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. (Atkins, 1998)
La ley deBeer-Lambert establece que la absorbancia de una solución es directamente proporcional a la concentración de la solución. Por tanto, la espectrometría UV/VIS puede usarse para determinar laconcentración de una solución. Es necesario saber con qué rapidez cambia la absorbancia con la concentración. Esto puede ser obtenido a partir de referencias (las tablas de coeficientes de extinción molar) o, conmás exactitud, determinándolo a partir de una curva de calibración.
El espectrofotómetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la Cromatografía Líquida de Alta Resolución (CLAR). La presenciade un analito da una respuesta que puede ser proporcional a la concentración. Para resultados precisos, la respuesta del instrumento al analito debe compararse con la respuesta a un estándar, lo que esmuy similar al uso de curvas de calibración. La respuesta (por ejemplo, el pico de altura) para una concentración particular se conoce como factor de respuesta. (Neil et al, 2009)
OBJETIVOS:*Investigar el rango de onda mas optimo de las muestras.
*Aprender a utilizar el espectrofotómetro.
*Realizar gráficas de una manera correcta con datos de barrido.
MATERIALES Y MÉTODOS:
Materiales:*Riboflavina
*Espectrofotometro
*Tampón fosfato
Método:
Barrido: Tomar tampón fosfato y poner en cinco tubos 900 µl, al tubo número uno y agregar 100 µl de la solución madre; tomar 100 µl de lasolución del tubo uno y ponerlos en el tubo dos, agitar; tomar 100 µl del tubo dos y ponerlos en el tubo tres, agitar; tomar del tubo tres 100 µl y ponerlo en el tubo cuatro, agitar y por último al...