Proteinas

DETERMINACION DE PROTEINAS

OBJETIVO:

• Determinar el % de proteína en una muestra de harina de pescado.

• Determinar la concentración de nitrógeno presente en la muestra para luego ser transformado a través de un factor en proteína.
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FUNDAMENTO

El método se basa en la destrucción de la materia orgánica con ácido sulfúrico concentrado, formándose sulfato de amonioque en exceso de hidróxido de sodio libera amoníaco, el que se destila recibiéndolo en:

a) Ácido sulfúrico donde se forma sulfato de amonio y el exceso de ácido es valorado conhidróxido de sodio en presencia de rojo de metilo


b) Ácido bórico formándose borato de amonio el que se valora con ácido clorhídrico.

MARCO TEÓRICO:

Proteínas:
Las proteínas son compuestos orgánicos quetienen los siguientes componentes: Carbono, Hidrógeno, Oxigeno, Nitrógeno, Fósforo y Azufre. Son biomoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. Una buena proteína depende de la cantidad de aminoácidos azufrados y nitrógenos azufrados que forman estructuras. Ejemplo: las uñas, en las paredes del estómago.
Las proteínas se encuentran en todo tipo de materia viva: vegetal, animal,microorganismos.
Las proteínas de origen cárnico generalmente contienen 16% de Nitrógeno; esto quiere decir que por cada 100gr de proteína hay 16gr de Nitrógeno.




Análisis de proteínas en alimentos
El clásico ensayo para medir concentración de proteínas en alimentos es el método de Kjeldahl. Este ensayo determina el nitrógeno total en una muestra
Este es un método oficial y descrito enmúltiples normativas: AOAC, US-EPA, ISO, Farmacopeas y distintas Directivas Comunitarias.

El método Kjeldahl sirve para determinar el contenido de nitrógeno en muestras orgánicas e inorgánicas. Se basa en la digestión de la muestra en ácido sulfúrico concentrado a ebullición, con la adición de un catalizador.
El único componente de la mayoría de los alimentos que contiene nitrógeno son las proteínas(las grasas, los carbohidratos y la fibra dietética no contienen nitrógeno). Si la cantidad de nitrógeno es multiplicada por un factor dependiente del tipo de proteína esperada en el alimento, la cantidad total de proteínas puede ser determinada. En las etiquetas de los alimentos, la proteína es expresada como el nitrógeno multiplicado por 6,25, porque el contenido de nitrógeno promedio de lasproteínas es de aproximadamente 16%. El método de Kjeldahl es usado porque es el método que la AOAC International ha adoptado y por lo tanto es usado por varias agencias alimentarias alrededor del mundo.

Método de Kjeldahl

Se realiza en tres etapas:
– Digestión: Consiste en la transformación de Nitrógeno orgánico a Nitrógeno inorgánico.
– Destilación: Liberación del amoniaco por acciónde una base fuerte para ser recibido en una solución de ácido sulfúrico de concentración conocida.
– Titulación: Neutralización del exceso del ácido.

MATERIAL Y EQUIPO

– Balanza analítica, sensibilidad 0.1 mg.
– Equipo Kjeldahl
– Manto calefactor
– Muestra de Harina de Pescado

REACTIVOS
– Ácido sulfúrico concentrado
– Sulfato de potasio o sulfato de sodio– Sulfato cúprico
– Solución de hidróxido de sodio al 0.1 N
– Solución de ácido sulfúrico 0.1 N.
– Solución indicadora de rojo de metilo al
– Indicador de FENOLTALEINA
– Solución de ácido clorhídrico 0.1 N


PROCEDIMIENTO

Síntesis:
La muestra se digiere hasta disolución y oxidación de la muestra. El nitrógeno contenido en la muestra se convierte en Sulfato deAmonio.

NH2 + H → NH3
(Grupo amino)

NH3 + H2SO4 → SO4(NH4)2
(amoniaco) (Sulfato de amonio)

Añadiendo un exceso de solución de sodio hidróxido, el ion amonio es liberado en forma de amoniaco, destilado y recogido sobre una solución de ácido bórico o sobre una solución valorada de ácido sulfúrico.
El amoniaco recogido es determinado con una solución valorada de ácido o...