Proteinas

Materiales y Métodos

Actividad 1

Para el cálculo de la curva de calibración de p-nitrofenol, se utilizaron los siguientes preparados:

|N° Preparado |1|2 |3 |4 |5 |
|Producto | | | | | |
|pNPP 2,5 µM(mL) |0,00 |0,25 |0,50 |0,75 |1,00 |
|Buffer pH 5 (mL) |2,00 |1,75 |1,50|1,25 |1,00 |
|Fosfato 10 mM (mL) |0,00 |0,00 |0,00 |0,00 |0,00 |
||
|N° Preparado |6 |7 |8 |9 |10 ||Producto | | | | | |
|pNPP 2,5 µM (mL) |0,00 |0,25|0,50 |0,75 |1,00 |
|Buffer pH 5 (mL) |2,00 |1,75 |1,50 |1,25 |1,00 |
|Fosfato 10 mM (mL)|0,50 |0,50 |0,50 |0,50 |0,50 |


Después de realizado los preparados, se incubaron todos por 5 minutos a 37°C. Llegado el tiempocorrespondiente, se les añadió 0,5 mL de la enzima fosfatasa ácida (0,5 mg/mL) y se procedió a incubar nuevamente a 37°C por 10 minutos. Mientras estaban en incubación, a 10 tubos de ensayo se le agregaron 4,5 mLde NaOH 0,05M, los cuales se utilizaron luego de la incubación, traspasando 0,5 mL de los primeros 10 preparados a los que sólo contenían NaOH 0,05M.

Con este procedimiento realizado se continuó a...