proteinas

PROTEÍNAS
1) RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS

El objetivo de esta experiencia es extraer proteínas de algunas sustancias para luego reconocer su naturaleza proteica. Para esto utilizaremos los ensayos de Biuret y Xantoproteico y ciertas muestras de  leche, gelatina, clara de huevo y aspartamo.


Materiales y Sustancias:  

-Vaso de Bohemia                       - Leche descremada en polvo
-Varilla de vidrio                         - Gelatina
- Mechero                                   - Clara de huevo
-Soporte                                     - Edulcorante
- Tela metálica                            - Ácido etanoico 2.0M
- Gradilla                                     - NaOH al 10%
- Tubo de ensayo                        - CuSO4 al 1%- Termómetro                              - Ácido nítrico concentrado
-Papel de filtro
Fundamento de la Técnica:
Las proteínas ocupan un lugar de máxima importancia entre las moléculas constituyentes de los seres vivos (biomoléculas). Prácticamente todos los procesos biológicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de moléculas .

Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de rutina básica cuando se aborda unesquema de purificación de una proteína concreta, cuando se quiere conocer la actividad específica de una preparación enzimática, para el diagnóstico de enfermedades, así como para muchos otros propósitos. Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV, b) para la formaciónde derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.

Ensayo de Biuret:
Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta.  El Hidróxido de Potasiono participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.


Consiste en tratar una proteína o péptido con Cu++ en medio alcalino, produciéndose una coloración violácea por formación de un complejo de coordinación entre el Cu++ y los pares electrónicos libres de los nitrógenos de los grupos amino de la unión peptídica. Son necesarias por lo menos dosuniones peptídicas para que tenga lugar la reacción.

La reacción del biuret no es una reacción específica para proteínas. Eso hace que un resultado positivo con este reactivo deba ser cuidadosamente evaluado para descartar los resultados falsos positivos

Un resultado negativo de la reacción del biuret sobre una muestra problema no necesariamente indica la ausencia de proteínas, ya que puedeocurrir: a) que no existan proteínas o péptidos en la muestra (ni tampoco otras sustancias no proteicas biuret positivas), b) que existan una o más sustancias interferentes en la muestra que impidan que se produzca la reacción (lo que daría lugar a un resultado falso negativo). Esto puede descartarse (o evitarse) si conozco de antemano la composición aproximada de la muestra. Por ejemplo, si deseodeterminar el contenido de péptidos generados por una reacción de hidrólisis ácida, los H+ del medio interferirán con la reacción del biuret, ya que ésta necesita de un medio alcalino para la formación del complejo con Cu++. En este caso la interferencia puede eliminarse alcalinizando el medio antes de realizar el ensayo (en caso contrario obtendría un falso negativo como resultado) y c) Que existanpéptidos, pero a una concentración inferior al límite de sensibilidad del método. Todo método permite determinar la presencia de un compuesto sólo si la concentración del mismo es superior a cierto valor. Existen métodos mucho más sensibles que el biuret.


Figura 1: Reacción de Biuret.


Ensayo de Xantoproteíco:

Esta reacción se usa para detectar la...