Protesis

“Bioinstrumentación III”





“Lector Elisa (Fotometría Vertical)”


Resumen- La experiencia en este laboratorio tiene la finalidad de darnos a conocer de manera práctica el modo de funcionamiento y la utilización de un lector Elisa, lo que nos permitirá esquematizar sus componentes principales, conocer sus especificaciones técnicas, su manutención y localización de averías. Con lainformación que nos entrega el lector de Elisa se podrá realizar una curva de calibración.

Palabras Claves- Lector Elisa, curva de calibración, averías.

Introducción

E
l lector Elisa (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay, en español, Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas), es una técnica de ensayo inmunoenzimático, basada en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una base,mediante anticuerpos que genera una reacción, esto quiere decir, que se basa en la especificidad del reconocimiento antígeno-anticuerpo.
Existen variantes en este tipos de ensayos, entre ellos podemos encontrar los métodos directos e indirectos, el método directo permite la detección del antígeno mediante un anticuerpo específico conjugado con una enzima como sistema de marcaje. El métodoindirecto, consiste en que el antígeno reacciona con el anticuerpo específico, el complejo antígeno-anticuerpo es entonces detectado por un segundo anticuerpo, este anticuerpo específico es el que está marcado enzimáticamente. Esto permite que un mismo anticuerpo marcado sea capaz de detectar diferentes antígenos. En ambos métodos, la reacción enzimática puede ser detectada espectrofotográficamentecon un lector ELISA.
La fotometría es un método óptico de análisis dentro del cual se encuentran la colorimetría y la espectrofotometría, en donde se mide la cantidad de luz absorbida por sustancias coloreadas o incoloreadas.
La fotometría vertical involucra un dispensador de muestra de volumen exacto (policubetas), en donde la dirección de la luz, que se considera como unaperturbación electromagnética que se propaga en el vacío en línea recta, va desde el fondo de las policubetas hasta el menisco o viceversa.


materiales

En el laboratorio se utilizó un lector de Elisa, fotómetro vertical “Titertek Multiskan MCC” de Labsystems y para estudiar su funcionamiento se utilizo una solución de Cromato de Potasio.

Metodología y Resultados

En el trabajo prácticorealizado en el laboratorio se observó el funcionamiento del lector de Elisa y sus principales componentes, con toda esta información que obtuvimos más la ayuda del manual del Lector de Elisa, se desarrollaron las siguientes actividades:



1.- Destapar equipo para inspección visual del instrumento, hacer mantención básica: identificar problemas del funcionamiento.

En la realización dellaboratorio se destapó el equipo para observar su sistema de funcionamiento e identificar sus partes principales.
Uno de los principales problemas que se observaron al hacer funcionar el equipo, fue que no encendió cuando correspondía. El problema se encontraba en que los fusibles no funcionaban correctamente y la corriente no alimentaba al sistema. Se solucionó conectando desde la red de 220V conun cable directo, sin conectar el relé de entrada de voltaje.

2.- Hacer esquema de los componentes, sacar fotos para reemplazar las fotos blanco y negro del manual, en la traducción del segmento del manual asignado.

Los componentes que presenta el lector de Elisa son:

[pic]
Fig. 1 Esquema de componentes.
El diagrama mostrado en la figura 1 muestra que el fotómetro vertical funciona. Elequipo consta de una lámpara alógena dicroica, la que tiene un sistema de reflector para evita que pase la luz infrarroja (dejándola atrás), de este modo evita ondas de calor indeseadas. Luego se tiene el Chopper, el cual controla discretización de la luz, después llega al filtro interferencial el que tiene un selector de longitudes de onda cuyo rango va desde 405 a 690 nm (esta es previamente...