Proteínas

Parte Experimental
A. Prueba para el grupo amida, reacción de Biuret: Coloque 1 ml de las soluciones de proteínas suministradas, ovoalbúmina, gelatina y caseína en cada uno de 3 tubos de ensayo. Agregue 1 ml de la solución de NaOH al 15% a cada tubo y mezcle bien. Luego, agregue una o dos gotas de la solución de sulfato de cobre a cada uno de los tubos y observe la aparición de un colorvioleta que indica la presencia del grupo amida.

Proteína
Resultado (reacción de Biuret)
Ovoalbúmina
Positivo
Gelatina
Positivo
Caseína
Positivo

Observación: Da positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas.
Cuestionario:
a. ¿A qué se debe la aparición de la coloración violeta?
La reacción se basa en la formaciónde un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.

b. ¿Por qué se le llama a esta prueba, reacción de Biuret?
Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret. La reaccióndebe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción.

B. Prueba para el grupo alfa-amino libre, reacción con la ninhidrina: Coloque 2ml de las proteínas suministradas, ovoalbúmina, gelatina y caseína en cada uno de 3 tubos de ensayo. Agregue 10 gotas de ninhidrina al 1% a cada uno de los tubos y agítelos.Ponga los tubos en baño María hirviente por 2 minutos. Déjelos enfriar y observe el color azul o púrpura que toman.

Proteína
Resultado en Ninhidrina
Ovoalbúmina
Positivo
Gelatina
Positivo
Caseína
Positivo

Observación: La prueba es positiva si se observa una coloración azul o purpura en el compuesto. Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8.Cuestionario:
a. ¿A qué se debe la formación del color?
La formación del color violeta se debe a la presencia de aminoácidos libres en la proteína, una característica propia de todas ellas.

b. ¿Qué grupo presente en los aminoácidos, péptidos y proteínas es responsable de la reacción con la ninhidrina?
El grupo a-amino presente en los aminoácidos, péptidos y proteínas son responsables de lareacción con la ninhidrina.

C. Reacción de Millón, una prueba para la tirosina. (Grupo hidroxi fenólico): Enumere 3 tubos de ensayo y coloque en el primero 2ml de ovoalbúmina, en el segundo 2ml de gelatina y en el tercero 2ml de caseína. Añada 4 gotas del reactivo de Millón a cada uno, colóquelos al baño María por 2 minutos y observe la formación de un precipitado de color rosa que indica lapresencia del aminoácido tirosina. Anote lo observado.

Proteína
Resultado en el reactivo de Millón
Ovoalbúmina
Positivo
Gelatina
Positivo
Caseína
Negativo

Observación: La prueba es positiva si se observa una coloración rosa en el compuesto, que indica la presencia de tirosina.
Cuestionario:

a. ¿Qué ocurre cuando se adiciona el reactivo a cada proteína?
Al añadir el reactivo de Millón enlas proteínas, se observó la formación de un precipitado blanco que progresivamente por acción del calor se tornó rosa.

b. ¿Qué grupo es necesario que esté presente para obtener una reacción positiva con este reactivo?
La reacción del Millón resulta positivo debido a la presencia del grupo hidroxi-fenilo en la molécula proteica.

c. ¿Qué aminoácidos contienen el grupo responsable de unareacción positiva?
Cualquier compuesto fenólico que no esté sustituido en la posición 3,5 como la tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reacción. De estos compuestos, sólo la tirosina está presente en las proteínas, de manera que sólo las proteínas que tienen este aminoácido ofrecen resultados positivos.



D. Reacción Xantoproteica, una prueba para grupos...