Protocolo Bradford
Páginas: 2 (296 palabras)
Publicado: 13 de octubre de 2015
-'
*flr-F-
-EEr'.' ''-'
:%i'aFr1
1t-
::.
.,,.,_:.
R
..,..
l:.
DE PROTEÍN€ pOn EL METODODE BRADFORD
en placaparaprotefustotales
de élulas y tejidos)
'5
-:_:r-Otielivo
Ct*ustific
ld}á''énI
peso molecularmayora $5
por el métodode Brafrfd-
a tuboseppéndg$
1. Al final del cultivo,
CenúiftBar las
para
el sobrenadante
5mi
y decantar.
a 4 "C( 1 3 ,
i pryt¡rde stock
MpH
4.
con N2 líquido).
,
-'.-_::;-'::r*J
Pasarr
a bañoa
6. Repetirpasos de
momento se puederl
r y dar vórtex.
:
elar y volver a congel'{q.Eneste
a
bs muestra$para determinarproteínas
elsig. pasoy'ul|tzaf
ensayode proteÍnas.Se puedeusardirectamente
la muestrao, diiui
en H 2 O(1 0 U+1 3 0 p ld e H zO) .
w'
8. p_iluirel reactivode Bradfoqüdqrftad) 1:5 en H2O,preparars-ólolo que se'
-'Lquiera
(Co"* $o*{ üctol.
*\eee?a ? I % pera*g -
9- Pasar2¡rl del sobrenadante
cla diluciiÉn
a cada pozo(püae-de96 pozos;,G
-l::
:
',:.
fiecerlopor duplicado.y añadir2ffipl dd reactivode Bradforddiluido1:5en
affa b¡destilada.
10.lr¡cubar
5miny leerabsorbancia
inmediaüamente
a]"=595nm.
Preparaciónde la curva estándarcon BfiA
:
1) DiluirI :10el stockde 1Omg/ml
de BSAen HzO
enHzO
2) Diluir1:5lasol de1mg/ml
---------+
.--:+
1mg/ml...
ffig't*t
\)
\por duplicadoa los pozoslos volúmenescorrespondihte*a-úda
3)':,Añadir
dosis.
:
4
3
t2
5
6
7
t
I
1011
12
'pl
0
A
2
B
3
C
4
D
E
f,
F
/¡r
{-
10
F{
12.5-:q¡r{!-::
Curvaertándarde BSA
#uw
&
*a:
__
(2tt0¡rg/ml):
B_lgtco'-:-_
0.¡rl
{i'4¡rurml
-}ul
r--'
3pl
L
S
€
'"
G
t*
á
_ 4pli
5u1
7 -5ul
i).6F9:ni
il-9Fs.ql'
l-lhe/mlt5ue/ml
qr?'
S*-+
stock t B0p1H.O Y queda
20¡11
Stockde BSA lmgiml Dih¡ir l:i
estasoluciónse toman los tliferentesvolúmenes
BSA 200prginr1I)e
para la curva estándar)
1
I
*flr-F-
-EEr'.' ''-'
:%i'aFr1
1t-
::.
.,,.,_:.
R
..,..
l:.
DE PROTEÍN€ pOn EL METODODE BRADFORD
en placaparaprotefustotales
de élulas y tejidos)
'5
-:_:r-Otielivo
Ct*ustific
ld}á''énI
peso molecularmayora $5
por el métodode Brafrfd-
a tuboseppéndg$
1. Al final del cultivo,
CenúiftBar las
para
el sobrenadante
5mi
y decantar.
a 4 "C( 1 3 ,
i pryt¡rde stock
MpH
4.
con N2 líquido).
,
-'.-_::;-'::r*J
Pasarr
a bañoa
6. Repetirpasos de
momento se puederl
r y dar vórtex.
:
elar y volver a congel'{q.Eneste
a
bs muestra$para determinarproteínas
elsig. pasoy'ul|tzaf
ensayode proteÍnas.Se puedeusardirectamente
la muestrao, diiui
en H 2 O(1 0 U+1 3 0 p ld e H zO) .
w'
8. p_iluirel reactivode Bradfoqüdqrftad) 1:5 en H2O,preparars-ólolo que se'
-'Lquiera
(Co"* $o*{ üctol.
*\eee?a ? I % pera*g -
9- Pasar2¡rl del sobrenadante
cla diluciiÉn
a cada pozo(püae-de96 pozos;,G
-l::
:
',:.
fiecerlopor duplicado.y añadir2ffipl dd reactivode Bradforddiluido1:5en
affa b¡destilada.
10.lr¡cubar
5miny leerabsorbancia
inmediaüamente
a]"=595nm.
Preparaciónde la curva estándarcon BfiA
:
1) DiluirI :10el stockde 1Omg/ml
de BSAen HzO
enHzO
2) Diluir1:5lasol de1mg/ml
---------+
.--:+
1mg/ml...
ffig't*t
\)
\por duplicadoa los pozoslos volúmenescorrespondihte*a-úda
3)':,Añadir
dosis.
:
4
3
t2
5
6
7
t
I
1011
12
'pl
0
A
2
B
3
C
4
D
E
f,
F
/¡r
{-
10
F{
12.5-:q¡r{!-::
Curvaertándarde BSA
#uw
&
*a:
__
(2tt0¡rg/ml):
B_lgtco'-:-_
0.¡rl
{i'4¡rurml
-}ul
r--'
3pl
L
S
€
'"
G
t*
á
_ 4pli
5u1
7 -5ul
i).6F9:ni
il-9Fs.ql'
l-lhe/mlt5ue/ml
qr?'
S*-+
stock t B0p1H.O Y queda
20¡11
Stockde BSA lmgiml Dih¡ir l:i
estasoluciónse toman los tliferentesvolúmenes
BSA 200prginr1I)e
para la curva estándar)
1
I
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.