Protocolo citogenetica

PROTOCOLO PARA PREPARACIÓN DE EXTENDIDO CELULAR (MITOSIS)


Materiales

➢ Raíces prefijadas
➢ Aceto-orceina
➢ Regla
➢ Estilete
➢pinza
➢ Porta y cubre objetos
➢ Mechero
➢ Bisturí


Procedimiento

Se retira una raíz del fijador (3:1 etanol-acido acético por mínimo 8 horas paraconservar bien las estructuras) y se sumerge en la solución de aceto-orceina en una caja de petri de vidrio. A continuación se flamea y se reposa por tresveces consecutivas para que el colorante penetre las estructuras. Se retira la raicilla y se pone sobre el portaobjetos con menos de una gota de dicha solución,esto se hace para facilitar la maceración y evitar que las partículas del colorante seco dificulten la observación.

Se procede a cortar el ápice de laraicilla y continuo a este corte, se realiza otro para obtener una porción de aproximadamente 2mm de longitud de la raíz, a partir del corte inicial. Esta porciónse aplana hasta obtener una película casi imperceptible sobre la superficie liquida del colorante, para obtener una sola capa de material; esto se logra con unmacerador plano y el estilete para que el material no se pierda sobre toda la superficie del porta objetos o en el mismo macerador. Luego del aplanado seadiciona otra gota de aceto-orceína, se pone el cubre objetos y se esperan 20 minutos para emplear la técnica de aplastado o Squash (se retira el exceso decolorante aplastando el cubreobjetos con una servilleta y usando el dedo pulgar, se trata de no producir deslizamiento del cubreobjetos con esta técnica)
[pic]