protocolo de enbriogenesis somatica

PRÁCTICA: CARACTERIZACIÓN DE LA EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA DE Coffea arábica

El café es el producto agrícola mas importante en el mercado internacional Dublin (1991 ), debido a esto, numerosos estudios de cultivos in vitro han sido desarrollados con el fin de obtener un mejoramiento genético del mismo.
Los estudios sobre la propagación asexual mediante la embriogénesis somática en café (Coffeaarabica L. y C. canephora P.) iniciaron a nivel mundial en la década de los 70's, con los estudios de callogénesis y embriogénesis de Staritsky (1970), Herman y Haas (1975), y Sondahl y Sharpe (1977). Después Ducos et al. (1993), Zamarripa (1994), Naidu y Sreenath (1998), Ducos et al. (1999), Nguyen et al. (1999), Afreen et al. (2002) e Ípeckci y Gözükirmizi (2003), demostraron que era posible elcultivo de células embriogénicas en medio líquido, con reportes de 2000 a 400 000 embriones por litro de medio de cultivo, según la especie y el genotipo.
Al evaluar C. canephora, C. arabica (2004) reportaron un fuerte efecto del genotipo sobre la inducción de la embriogénesis somática. Por tal motivo es frecuente observar que un medio de cultivo induzca distintas respuestas en la inducción deembriogénesis en diversos genotipos (Zamarripa y Pétiard 2004; Cueto et al., 2007).
La concentración o ausencia de algunos componentes en los medios de cultivo, como sales minerales, ciertas citocininas y auxinas, así como el balance entre estos reguladores y otros componentes como antioxidantes o fungicidas, desencadenan respuestas variadas que en muchas ocasiones no son las adecuadas para unproceso de multiplicación masiva eficiente y práctica (Margara 1988; Pido et al., 1995).
El cultivo y procesamiento del café tiene grandes repercusiones tecnológicas y económicas en nuestro país (De la Peña Seaman Clelia, 2010). La productividad del cafeto se ve muy afectada por una cantidad importante de plagas y variedades que la atacan; por otro lado, la pérdida del poder germinativo de lasemilla de café afecta en la producción de esta misma.

Actualmente, la micropropagación in vitro del café es una estrategia alternativa de mejoramiento genético que permite rescatar y propagar con mayor eficiencia los genotipos productivos llamados “elite” (De la Peña Seaman Clelia, 2010). La embriogénesis somática (ES) ha sido una técnica muy eficiente para la elevada producción de embrionessomáticos, acortando tiempos de cultivo y aumentando la selectividad de plantas elite. Sin embargo, C. arabica a diferencia de su homóloga C. canephora ha sido todo un reto multiplicarla in vitro por su baja eficiencia en la producción de embriones somáticos y se desconoce la razón de porqué dos especies tan parecidas tengan una respuesta tan diferente in vitro.


Diseño de Práctica: Alumnos de 8AVB1. COMPETENCIA A DESARROLLAR

1 Obtener embriones somáticos de explantes de Coffea arábica a corto plazo comparado con los protocolos reportados para la misma especie.


2. MATERIALES Y REACTIVOS

Tabla 1. Materiales y Reactivos
Materiales
Reactivos
2
Vasos de precipitado de 1L

Sales MS
30
Matraz Erlenmeyer de 125 ml

Myoinositol
2c/u
Probeta de 10, 50 y 100 mlTiamina
2
corchos

Cisteína
2
sacavocado

Sacarosa
4
Pinzas de disección

2, 4 – D

Algodón

6 – BA

Papel aluminio

Piridoxina

Ligas

Ácido nicotínico
40
Frascos pequeños

Agar PDA

Alcohol al 70%

Colorante azul

Agua estéril


6
Cajas Petri



2 EQUIPOS E INSTRUMENTOS
Tabla 2. Equipos e Instrumentos
Equipos de Laboratorio
Equipos de ProtecciónPersonal
1
Autoclave horizontal
1
Bata de laboratorio

potenciómetro



Microondas



Campana de cultivo de tejidos vegetales




4. PREVENCION Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Para evitar accidentes en el laboratorio, es conveniente que consideres los reglamentos y las exigencias del laboratorio, así como el seguimiento de las instrucciones de la práctica.
5. DESARROLLO...