Protocolo de extraccion de adn con kit ezna

PROTOCOLO DE EXTRACCION DE ADN CON KIT EZNA.

1.- Muestras de 20-30 mg de tejido. (Se sugiere tomar 100 mg)

2.- Adicionar 200 ul de buffer TL

3.- Adicionar 25 ul de proteasa OB

4.- Mezclarbien en vortex

5.- Incubar en baño maría a 56ºC por mínimo 3 horas.

6.- Centrifugar por 2 minutos a máxima velocidad (14.500 rpm).

7.- Recupere el sobrenadante y transfieraloa un tubo nuevo.8.- Adicionar 220 ul de buffer BL. Mezcle mediante vortex

9.- Adicione 220 ul de etanol absoluto y mezcle mediante vortex

10.- Prepare la columna AZUL adicionando 100 ul de buffer deequilibrio e insértela en un tubo de colección de 2 ml.

11.- Centrifugue a máxima velocidad (14.500 rpm) por 60 segundos

12.- Descarte el líquido filtrado y el tubo de colección del líquido también.13.- Transfiera ahora la muestra completa, incluyendo el precipitado formado, en la columna AZUL e insertela en un tubo de colección nuevo.

14.- Centrifugue a 10.000 g (12.000 rpm) por 60segundos.

15.- Descarte el líquido filtrado y el tubo de colección

16.- Coloque la columna AZUL en un nuevo tubo de colección.

17.- Adicione 500 ul de buffer HB.

18.- Centrifugue a 10.000 g(12.000 rpm) por 60 segundos

19.- Descarte el líquido filtrado y reutilice el tubo en el siguiente paso

20.- Adicione 700 ul de buffer de lavado (Wash buffer).

21.- Centrifugue 60 segundos a 12.000rpm.

22.- Descarte el líquido filtrado y reutilice el tubo de colección

23.- Adicionar nuevamente 400 ul de buffer de lavado

24.- Centrifugue a 10.000 g (12.000 rpm) por 3 minutos para secarla membrana. Descarte el líquido filtrado y el tubo de colección con mucho cuidado evitando que el líquido permanezca en la columna AZUL.

25.- Si se observa gotitas de líquido en la columna AZULcentrifugue utilizando otro tubo de colección por 2 minutos a máxima velocidad (14.500 rpm).

26.- Coloque la columna AZUL en un tubo nuevo eppendorf y adicione 50ul de buffer de elusión. Este...