Protocolo Del Gel De Electroforesis
Páginas: 2 (463 palabras)
Publicado: 27 de noviembre de 2012
v-
GEL DE ELECTROFORESIS
(PARA COMPROBACIÓN DE LA SONDA)
Lavar la cubeta
Freparar, en probetas estériles, 500 ml de TAE (1X) y 300 rnl de SDS (10X). Lav¡r la cubeta y todos los elenrentosplásticos diversos en SDS {10X) durante 15' Lavar cubetay elementos plásticos con dH2O, varios baños durante 15').
Gel de agarosa
Mezclar, en ur vaso de precipitadc, 0.65 gr de agarosa ultrapura+ ó5 ml de TAE (1X).
Calentar en el microondas en dos tiempos:
1,5 minutos, sacarlo y agitarla la mezcla
40 segrrndos más
Se transfiere la mezcla
a un frasco estéril con tapón y se e*fría. Seañade entonces 0,4
ligprañette
-gl #el-Star-La
se coloca el peine.
nrez:el4
sa@ehrc}de-de
laeubetay
Se deja
solidificar durante 15'-20'.
(13pi
el gel en la cubeta, se retirael peine y de sonda + !5¡rl dH:O +1 pl de azul l0X).
Se coloca
,"
"olo"*
,
i0 pl de.mezcla de sonda
L. ¡fr.¡or
2v/t+cotrc¡¿nzt'
Qa"io.¿\ú
Q'-\ou\ \
/
A
\
qo
TAE {lX)y se enchufa la cubeta para la electrofarésis (las sondas corren desde el polo negativo al positivo).
Slectroforésis
80-100 voltios, no m¿is de 15 minutos (posible degradación de la sonda porel calor)
Se fotografia el ge1.
-
SINTESIS Y MARCAJE I}E SONT}AS FRIAS I}N, RIBOSONI}AS
{adapfacién del protocola de la unidad U-106 del INSERM; París, 1997}
Marcaje con Digoxigenina-UTP {10mM} o fluo-UTP {10
mM}.
I
1.- Mezcla:
l-*,^ .-n?.y'..65 Sr'+'yr. \tt o.' ' L'
variable, ajustar según concentración del
I É{rO {estéril-RNAse &ee) '$ fampOn de transcripción {10X)
I$RNA labelling Ms( ' {RNA guard)
'.RNAsina g RNA polimerasa (la
BNA
2 Vl 3 pl {variable, según su concentración) 2 vl
¡rrtlDNn lineal (aproximadamenle 0.3 ¡ig/¡rl)
correspondiente)
i
1irl pl
Especialmente frágiles son las dcs últimas sustancias ENAsina y RNA polimerasa), que deben sacarse de:20"C el menas tiempo posible, y mantenerse en cubeta de hielo especial a esa misma...
GEL DE ELECTROFORESIS
(PARA COMPROBACIÓN DE LA SONDA)
Lavar la cubeta
Freparar, en probetas estériles, 500 ml de TAE (1X) y 300 rnl de SDS (10X). Lav¡r la cubeta y todos los elenrentosplásticos diversos en SDS {10X) durante 15' Lavar cubetay elementos plásticos con dH2O, varios baños durante 15').
Gel de agarosa
Mezclar, en ur vaso de precipitadc, 0.65 gr de agarosa ultrapura+ ó5 ml de TAE (1X).
Calentar en el microondas en dos tiempos:
1,5 minutos, sacarlo y agitarla la mezcla
40 segrrndos más
Se transfiere la mezcla
a un frasco estéril con tapón y se e*fría. Seañade entonces 0,4
ligprañette
-gl #el-Star-La
se coloca el peine.
nrez:el4
sa@ehrc}de-de
laeubetay
Se deja
solidificar durante 15'-20'.
(13pi
el gel en la cubeta, se retirael peine y de sonda + !5¡rl dH:O +1 pl de azul l0X).
Se coloca
,"
"olo"*
,
i0 pl de.mezcla de sonda
L. ¡fr.¡or
2v/t+cotrc¡¿nzt'
Qa"io.¿\ú
Q'-\ou\ \
/
A
\
qo
TAE {lX)y se enchufa la cubeta para la electrofarésis (las sondas corren desde el polo negativo al positivo).
Slectroforésis
80-100 voltios, no m¿is de 15 minutos (posible degradación de la sonda porel calor)
Se fotografia el ge1.
-
SINTESIS Y MARCAJE I}E SONT}AS FRIAS I}N, RIBOSONI}AS
{adapfacién del protocola de la unidad U-106 del INSERM; París, 1997}
Marcaje con Digoxigenina-UTP {10mM} o fluo-UTP {10
mM}.
I
1.- Mezcla:
l-*,^ .-n?.y'..65 Sr'+'yr. \tt o.' ' L'
variable, ajustar según concentración del
I É{rO {estéril-RNAse &ee) '$ fampOn de transcripción {10X)
I$RNA labelling Ms( ' {RNA guard)
'.RNAsina g RNA polimerasa (la
BNA
2 Vl 3 pl {variable, según su concentración) 2 vl
¡rrtlDNn lineal (aproximadamenle 0.3 ¡ig/¡rl)
correspondiente)
i
1irl pl
Especialmente frágiles son las dcs últimas sustancias ENAsina y RNA polimerasa), que deben sacarse de:20"C el menas tiempo posible, y mantenerse en cubeta de hielo especial a esa misma...
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