Protocolo Extracción Ác. Grasos

 Día 1: Extracción de ácidos grasos en muestras de hígado. Método de Folch.

i. Con una varilla de metal con un extremo acucharado,obtener en cuatro tubos con tapón de rosca bien rotulados 0,5 gramos de hígado de la “rata A” en dos de ellos, y 0,5 gramos de hígado de la “rata B”en los otros dos. El pesaje se realizaría en una báscula de precisión.

ii. Añadir a cada tubo añadir 2 mL de mezcla solvente formada porcloroformo y metanol en relación 2:1, y mezclar con un agitador vórtex. Las muestras se incubaron durante 30 minutos en un recipiente conhielo.

iii. Añadir 5 mL de agua, y volver a homogeneizar con agitador vórtex.

iv. Centrifugar las muestras a 2.500 r.p.m. durante 5 minutos.Una vez centrifugado se extrae el sobrenadante con una pipeta Pasteur y se elimina.

v. Se añaden 5 mL de solución formada por cloroformo,metanol y agua en relación 1:15:15 para hacer un segundo lavado. Volver a homogeneizar con agitador vórtex.

vi. Centrifugar a 2.500 r.p.m.durante 5 minutos. Eliminar el sobrenadante con pipeta Pasteur.

vii. Resuspender el resultado con 5 mL de agua saturada en NaCl paraeliminar el material proteico, y añadir 2 mL de hexano para solubilizar los ácidos grasos. Centrifugar a 2.500 r.p.m. durante 10 minutos.

viii.Extraer aproximadamente 1 mL del sobrenadante con una pipeta Pasteur y colocarlo en tubos eppendorf. Guardar las muestras en frigorífico.