Protocolo toxicidad

PROTOCOLO TOXICIDAD AGUDA


Diseño Experimental:
Se determinará la Toxicidad Aguda por la vía oral del producto natural mediante los procedimientos descritos en el protocolo de la OECD (Organización Económica para el Comercio y Desarrollo) y el Manual de CYTEC.
Animales:
Para el ensayo se usarán ratas de la cepa Holtzman machos y hembras nulíparas de 8-10 semanas de edad con un rango depeso entre 180 a 250 g; provenientes de las instalaciones del bioterio del Instituto Nacional de Salud (INS).
Dada la procedencia de los animales, en el presente ensayo, el proceso de cuarentena se considerara no aplicable. En tal virtud, los animales criados para experimentación se trasladaran de la sala de cría a la sala de experimentación dentro de las mismas instalaciones de los laboratoriosde Investigación y desarrollo (LID) y por lo cual no necesitaran de un período de aclimatación, ya que no se trasladaran a instalaciones de condiciones de temperatura y humedad diferentes.
El total de animales seran distribuidos en 6 grupos de 5 animales por tratamiento (hembras y machos), siendo un grupo el control.
Tratamiento – Dosis:
La prueba incluirá un total de dos tratamientos. El rangode dosis tratado sera de 5g/Kg de peso del animal. Se emplearan 5 hembras y 5 machos en cada tratamiento. Además, se tendrá un grupo control, al que se le administrará agua.
Las concentraciones de ensayo serán derivadas de la dosificación recomendada por el fabricante. La dosificación del tratamiento A corresponde a la concentración diaria recomendada. Las dosis restantes serán obtenidasconsiderando un índice de toxicidad y con ello obtenido los valores de concentración detallados.

Variables: Las variables registradas durante el ensayo corresponderán a:
Efectos tóxicos producidos por la aplicación única por la vía oral del producto.
Variación en peso: 1, 7 y 14 días para cada uno de los animales por tratamiento.
Mortalidad:
Diariamente se realizará el registro de la presenciade animales muertos por tratamiento.
Evaluación de Signos Clínicos.

Condiciones de Ensayo

La prueba será realizada en un área (bioterio) provista de sistema de ventilación. Las condiciones de temperatura, humedad y luz ambiental en el período de experimentación tuvieron los siguientes valores: temperatura = 23 + 2; humedad = < 70 %; 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.
Previo alinicio de la prueba, todos los animales seleccionados para el estudio serán restringidos en su alimentación la noche previa al inicio del ensayo (12 horas). Los animales serán mantenidos en jaulas de polietileno con tapas de metal que aloja el agua y alimento. Las jaulas contenían viruta autoclavada (cambiada diariamente); y los animales serán distribuidos al azar.
Las jaulas serán identificadas contarjetas que contenían la siguiente información: código de muestra, prueba a realizar, producto de prueba, sexo, número de animales, fecha de inicio y fecha de término de la prueba.
Se administrará un volumen de 5 mL de la muestra del extracto 1 o 2. Luego de administrar el respectivo tratamiento, el animal se monitorizará visualmente para asegurar que no se produjeran efectos adversos (vómito y/odificultad respiratoria). El suministro de comida se restablecerá 4 horas después de la dosificación. El acceso al agua y alimento será ad libitum.
Parámetros Abióticos
Luego de la administración de la dosis, se realizara un seguimiento clínico a los animales teniendo como posibles resultados la muerte de los ejemplares. Se harán registros del peso corporal en los días: 0, 1, 7 y 14.Valoración Clínica
Cada animal será retirado de su jaula diariamente durante los 14 días de evaluación, para realizar una valoración clínica que incluyo (Tabla 1): condición general, piel y pelaje, ojos, hocico (narinas), cavidad oral, abdomen y genitales externos. También se evaluara la frecuencia respiratoria y se palpo el abdomen en busca de masa patológica.
Tabla 1. Signos y síntomas evaluados...