Proyecto De Titulo Pcr

PROYECTO DE TÍTULO

REACCIÓN EN CADENA DE POLIMERASA
Y ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA

ÍNDICE

* Introducción Pág. 4

* Capítulo Primero: Marco teórico Pág. 5 a 13

* 1. Extracción de ADN Pág. 5
* 1.1. Streptococcus pyogenes Pág. 5

* 2. Reacción en Cadena de Polimerasa Pág. 6 a 11
* 2.1. Reactivos de la Reacción Pág. 6 a 7
* 2.2.Funcionamiento de la PCR Pág. 8
* 2.3. ¿Qué hacer cuando el PCR falla? Pág. 9
* 2.4. Contaminación del proceso de PCR Pág. 10 a 11
* 2.5. Inhibidores de la Reacción Pág. 11

* 3. Electroforesis en Geles de Agarosa Pág. 12 a 13

* Capítulo Segundo: Metodología Pág. 14 a 18

* Proceso de extracción de ADN Pág. 14

* Proceso de PCR Pág. 15a 16

* Proceso de Electroforesis Pág. 17 a 18

* Conclusión Pág. 19

* Bibliografía Pág. 20

* DOCUMENTO ANEXO: “Ficha de Trabajo: Amplificación del Gen en Estudio Mediante PCR”.

INTRODUCCIÓN

Durante las últimas décadas, el siempre perseguido diagnóstico rápido, sensible y fiable de los agentes causales de las enfermedades infecciosas ha comenzado aexperimentar una revolucionaria transformación. La aplicación de técnicas microbiológicas convencionales, que requieren del crecimiento de los microorganismos para su posterior análisis fenotípico y bioquímico, ha pasado a ser complementada con la aplicación de métodos genéticos de diagnóstico.
En la actualidad, de entre tales metodologías, la reacción en cadena de polimerasa (PCR) es la mássensible y la que se aplica más satisfactoriamente dentro de la microbiología clínica. En particular, en el caso de los patógenos que presentan crecimiento lento, o bien, en las infecciones atribuibles a un variado grupo de microorganismos patógenos, la PCR ha aportado un gran valor diagnóstico.
Es necesario mencionar que los estudios genéticos de los microorganismos permiten crear una vigilanciaepidemiológica detallada, ya que, nos dan a conocer información relevante como: mutaciones genéticas, mecanismos de resistencia a medicamentos o genes que expresen la virulencia de los agentes patógenos.
La genética molecular es una de las ciencias más revolucionarias dentro de la microbiología clínica, debido a que entrega información de calidad y de forma constante. Es por esto último que lamayoría de los laboratorios planea equipar sus dependencias con equipos que permitan ejercer el trabajo genético y capacitar a los profesionales en estas áreas, debido a que el nuevo proceso diagnóstico será confirmado por la técnica de PCR y posterior secuenciamiento genético.
Es por esto, que en el presente informe de título, abarcaré el tema de la reacción en cadena de polimerasa desde un punto devista amplio, detallando los procesos que lo anteceden, tal es el caso de la extracción de ADN, y terminando con la técnica de electroforesis, la cual confirma la presencia de material genético amplificado gracias al proceso de PCR.
Para ser más clara la información desplegada en este informe, he decidido separar en dos capítulos diferentes este proyecto de título. El primer capítulo será elmarco teórico, en donde se definirán las bases de funcionamiento de cada técnica y, por otra parte, en la metodología se describirán los procesos prácticos que se deben realizar para llevar a cabo las técnicas de lisis celular, PCR y electroforesis.

CAPÍTULO PRIMERO: MARCO TEÓRICO

1. EXTRACCIÓN DE ADN

Antes de comenzar a analizar sobre cómo es posible extraer desde un compartimento celularácidos nucleícos de calidad analítica, debemos detallar cuál será el microorganismo que deseamos analizar genéticamente. En esta ocasión, he decidido trabajar con el Streptococcus pyogenes, ya que, su proceso de PCR es sencillo de realizar en comparación con otros microorganismos. A continuación, se define a grandes rasgos las características de esta bacteria:
1.1. Streptococcus pyogenes:...