PRUEBA DE ROJO DE METILO

“PRUEBA DE ROJO DE METILO.”


INTRODUCCION
La prueba de metilo es una cuantitativa de la producción de ácido, que requiere que los microorganismos positivos produzcan ácidos fuertes (láctico, acético, fórmico) de la glucosa a través de la vía de fermentación acido mixta. Como muchas especies de la familia Enterobacteriaceae pueden producir suficientes cantidades de ácidos fuertes que puedendetectarse mediante el indicador rojo de metilo durante las fases iniciales de la incubación, solo los microorganismos que pueden mantener este pH bajo después de incubaciones prolongadas (48 a 72 horas). El rojo de metilo es un indicador de pH. Actúa entre pH 4,2 y 6,3 variando desde rojo (pH 4,2) a amarillo (pH 6,3). Mediante esta prueba se determina la capacidad de un microorganismo de fermentarla glucosa con producción de ácido por la vía butanodiolica.
OBJETIVO
Determinar la capacidad de fermentar la glucosa en algunas poblaciones microbianas.
MATERIALES
2 Matraz de 250ml
Pipeta de 10ml
Aza de inoculación
Mechero
Vaso depresipitado
Caja Petri
Carne molida
Tubos de ensaye
MEDIOS:
Agar para estafilococos
Caldo R.M.V.P.
.7g de peptona
.5g de glucosa
100ml de agua destilada
REACTIVOS:
Aguadestilada
Rojo de metilo
.2g de rojo de metilo
60ml de alcohol a 96%
Agua destilada
METODOLOGIA
a) PREPARACION DE LA DILUCION:
1. moler la carne con agua destilada.
2. Disolver correctamente.

b) AISLAMIENTO DE ESTAFILOCOCOS:
1. Preparar el medio en agar.
2. Colocar en autoclave para esterilizar.
3. Rotular la caja Petri y vaciar 1 ml de dilución.
4. Colocar el medio ya enfriado y mover encírculo.
5. Dejar coagular y colocar en autoclave por 24hrs.

c) PREPARACION DEL CALDO R.M.V.P:
1. Pesar todos los reactivos.
2. Colocar 100ml de agua destilada en un matraz.
3. Colocar todos los reactivos y mover hasta homogenizar.

d) SIEMBRA EN TUBO CON MEDIO CALDO R.M.V.P:
1. Colocar 12ml de caldo en 4 tubos de ensaye.
2. Tapar con aluminio y cinta, rotular.
3. Colocar a la autoclave y esterilizar.4. Dejar enfriar el medio.
5. Esterilizar el aza y de la muestra de estafilococos en caja colocar 2 a 3 azadas en cada tubo de ensaye.
6. Volver a tapar con aluminio y cinta, rotular y colocar a la autoclave por 24 hrs.

e) PREPARACION DE ROJO DE METILO:
1. Pesar todos los reactivos mencionados antes.
2. Colocar en un matraz aforado y aforar a 100ml.
3. Disolver correctamente los reactivos.

f)PRUEBA DE ROJO DE METILO:
1. Colocar 5ml del medio con muestra en 1 tubo de ensaye limpio.
2. Colocar 5 gotas de la solución de rojo de metilo.
3. Realizar esto en 3 tubos de ensaye
4. Observar los resultados.



RESULTADOS



























CONCLUCION
La prueba de rojo de metilo es una prueba cuantitativa basada en el uso de un indicador de pH (cuando un microorganismo fermenta laglucosa).
Los diferentes patrones de fermentación varían de acuerdo a las enzimas relacionadas con el metabolismo del ácido pirúvico en el microorganismo.
Los microorganismo positivos de rojo de metilo continúan con la producción de ácidos, lo que origina el PH bajo que vence el sistema de buffer fosfato y mantiene un ambiente acido en el medio.
Los microorganismos negativos a la prueba de rojo de metilometabolizan a un más los productos de fermentación iniciales por descarboxilacion para producir acetilmetilcarbonilo neutro (acetoina) que produce una disminución de acidez en el medio y eleva el pH hacia la neutralidad.
La validez de la prueba de rojo de metilo depende de una incubación prolongada (2 dias) a 35-37°C para permitir que ocurra la diferencia en el metabolismo de la glucosa. lo quepermite la demostración de ion hidrogeno limitante (pH bajo), y concentración de ion hidrogeno más baja (pH alto).
CUESTIONARIO
1. ¿Qué aplicación tiene la prueba de rojo de metilo?
El rojo de metilo es un indicador de pH con un rango entre 6(amarillo) y 4.4 (rojo). El pH al cual el rojo de metilo detecta ácidos es mucho más bajo que el pH correspondiente a otros indicadores utilizados en medios...