Prueba escherichia coli y salmonella

Prueba Escherichia coli (producción de indol)

Para el propósito de este análisis, E. coli esta definida como una especie de bacteria del grupo de los coliformes que pueden producir indol dentro de la 24 +- 2 h cuando crecen en agua tristona a 44.5 +- 0.2 ºC. Sin embargo, debería ser notado que Klebsiella oxytoca es indol positivo. Usar agua triptona y reactivo kovacs` para la prueba de E.coli en un total de cultivos positivos de coliformes.

a. Reactivos:

1) Agua triptona:

Tristona……………………….. 20 g
Cloruro de sodio………………...5 g
Agua de calidad – reactivo………1L

Añadir los ingredientes al agua y mezclar bien hasta disolver. Ajuste el pH a 7.5. Dispensar en porciones de 5 ml en los tubos , tapar, esterilizar por 10 min a 115ºC.

2)Reactivo Kovacs´

p-Dimetilaminobenzaldehído…………….5g
Alcohol amílico (grado analítico)……...75 ml
Ácido clorhídrico concentrado…………25ml

Disolver el aldehído en alcohol. Agregar cuidadosamente acido a la mezcla alcohol – aldehído y agitar para mezclar. Almacenar en la oscuridad a 4 ºC.

Precaución: el reactivo en corrosivo e inflamable. Este reactivo debería serde color amarillo pálido. El uso de alcohol amílico de baja calidad puede producir un reactivo de color oscuro; no utilizar como reactivo.

b. Procedimiento: agitar suavemente o rotar los tubos o botellas que muestren crecimiento, gas, o la acidez. Usando el asa de siembra transfiera lo crecido de tubos de fermentación presuntiva o botella a un tubo que contenga 5 ml de agua tristona.Incubar los tubos inoculados de agua triptona y mantener a 44.5ºC por 24+- 2 h en baño maria o incubadora. Después de la incubación, añada0.2 a 0.3 ml del reactivo kovacs´a cada tubo de agua tristona.

c. Interpretación: examinar todos los tubos para ver la aparición de un color rojo profundo en la capa superior. La presencia de color rojo es considerado un resultado positivo para E. coli(indol positivo). Para facilitar la interpretación de los resultados, incorpore en los ensayos un control positivo que consiste en una cepa de E. coli (indol positivo), un control negativo que consiste en un coliforme total conocido (por ejemplo Enterobacter cloacae(indol negativo) ) y un control del reactivo sin inoculo. Si son usados múltiples tubos calcular por NMP para E. coli del numero detubos indol positivo como se describe en la Sección 9221 C. Cuando usamos solo un tubo o solo una botella presuntiva, reportar como presencia o ausencia de E. coli.

9260 B. aislamiento cualitativo general y procedimientos de identificación para Salmonella.

En lugar de un protocolo específico para la detección de salmonella en el agua, un breve resumen de los métodos adecuados para larecuperación de estos organismos se da. Los métodos actualmente disponibles, se han utilizado en numerosas investigaciones de campo para demostrar salmonella en ambientes de agua dulce y marina. La aparición de salmonella en el agua es muy variable, hay limitaciones y las variaciones en la sensibilidad y la selectividad de los procedimientos aceptados de salmonella aislada para la detección de los másde 2300 serotipos de salmonella actualmente reconocidos. Por lo tanto, un resultado negativo por cualquiera de estos métodos no implica la ausencia de salmonella, ni tampoco implica la ausencia de otros patógenos.

1. Técnica de concentración

Salmonella son omnipresentes en el medio ambiente y pueden ser detectados en bajas concentraciones en las aguas más superficiales. Estosorganismos suelen estar presentes en pequeñas cantidades en comparación con los coliformes, por lo que es necesario examinar una muestra relativamente grande para aislar los microorganismos.

d. Técnica filtro de membrana: para examinar aguas de baja turbidez, filtrar varios litros a través de una membrana estéril de 142 mm de diámetro o de 0.45 um del tamaño del poro. Para aguas turbias,...