Pruebas Bioquímicas

PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Las pruebas Bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permite identificar distintos microrganismos presentes. Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecerincorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microrganismo del estudio.
Posteriormente mencionare alguno de las pruebas que son utilizadas para pruebas bioquímicas, en que consiste y tanto para qué sirven.
PYR:
Prueba rápida, utilizada fundamentalmente para la identificación de Streptococcuspyogenes y Enterococcus spp.
Es útil para la caracterización preliminar de Streptococcus, Enterococcus y de microorganismos símil estreptococos.

* Fundamento
Los discos contienen el sustrato: pirrolidonil-beta-naftilamida, y la prueba consiste en determinar la presencia de la enzima l-pirrolidonil arilamidasa.
Los microorganismos que contienen dicha enzima, pueden hidrolizar el sustratopresente en los discos en forma rápida, con liberación del grupo pirrólico, el cual, reacciona con el reactivo revelador: N-N dimetilamino cinamaldehído.
Esta es una prueba presuntiva específica tanto para los estreptococos b hemolíticos del grupo A, como para los Enterococcus spp; y permite diferenciar los estreptococos del grupo A de otras especies de Streptococcus.
Es altamente sensible yreemplaza a la bacitracina y a la prueba de tolerancia a la sal (crecimiento en NaCl al 6.5%).
A menudo se usa esta prueba junto con la prueba de leucinaaminopeptidasa (LAP).
Debe tenerse en cuenta que algunas especies de Staphylococcus (S. lugdunensis, S. scheleiferi, S. haemolyticus y S. intermedius) son generalmente PYR positiva, por lo que se puede utilizar para diferenciar Staphylococcus.

*Metodología

Siembra
A partir de un cultivo puro, hacer una suspensión densa en 50 µl de solución fisiológica estéril, y agregar un disco de PYR-A-ENTEROCOCOS .

Incubación
Durante 30 minutos a 35-37 °C, en aerobiosis.
Cuando se utiliza para diferenciar Staphylococcus, la incubación se debe realizar, según algunos investigadores, durante 2 horas a 35–37 ºC, en aerobiosis.
-Agregar una gotade reactivo revelador .
-Dejar a temperatura ambiente, hasta 5 minutos.
Resultados
Positivo: observación de color rosa-rojo en el disco.
Negativo: la suspensión y/o el disco permanecen incoloros o de color amarillo.
CAMP:
La prueba de CAMP se utiliza para la identificación presuntiva de S. agalactiae (grupo B deLancefield).
En esta prueba se observa un efecto sinérgico que se produce alinteractuar el factor CAMP producido por cepas de S .agalactiae con la hemolisina β de Staphylococcus aureus.
Ambos son productos extracelulares que difunden en el medio de cultivo para producir dicho efecto en forma de flecha cuando se utilizan placas de agar sangre preparada con eritrocitos ovinos o bovinos.
Una vez inoculados, los medios de cultivo deben ser incubados a 35-37oC por 18-24 horas.Algunos autores recomiendan no incubar las placas de agar sangre para la prueba de CAMP en una atmósfera enriquecida con CO2 debido a un probable efecto inhibitorio sobre el sinergismo.
HIDRÓLISIS DE HIPURATO:
El hipurato es un compuesto orgánico aromático que puede ser hidrolizado enzimáticamente originado benzoato y glicina. Este test se usa a menudo para diferenciar especies deStreptococcus.
Consiste en una suspensión de bacterias se añade a una solución de hipurato y de incuba 2 horas. En ese momento se añade nihidrina.
La prueba no debe utilizarse indiscriminadamente a todos los grupos de estreptococcus; solo es útil para los estreptococcus β -Hemolíticos de origen humano o bovino y solo debe usarse con ellos.

REDUCCIÓN DE NITRATOS:
Sirve para determinar la capacidad de...