Pruebas Bioquímicas

1.- ROJO DE METILO
a) Principio de la prueba
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo de viraje de entre 6 (amarillo) y 4 (rojo) que se usa para ver la producción de ácidos por fermentación.

Una de las características taxonómicas que se usa para identificar los diferentes géneros de entero bacterias lo constituyen el tipo y la producción de fermentación de la glucosa. Seconocen 2 tipos generales: la de ácido-mixta y a del 2,3-butanodiol.

b) Objetivo de la prueba
Determinar habilidad de las bacterias para producir ácidos estables por fermentación de la glucosa

c) Reacción química o base bioquímica




α-D-glucosa
Ácido piruvico

d) Interpretación de resultados incluyendo imágenes
Positivo: La prueba es positiva si se desarrolla uncolor más o menos estable. Esto indicará que la producción de ácido fue suficiente para producir un cambio de pH que genere un viraje en el indicador.











e) Bibliografía
MacFaddin F. Jean, 2000, Prueba rojo de metilo, Pp. 301-306, En: Pruebas Bioquímicas para la Identificación de Bacterias de Importancia Clínica, 3º Edición, S. Rondinone & O. Giovanniello, EditorialPanamericana, Buenos Aires Argentina




2.- VOGES-PROSKAUER
a) Principio de la prueba
Las enterobacterias son anaerobios facultativos que usan la glucosa en dos fases:
1º Degradan la glucosa por la vía oxidativa hasta que consumen el oxigeno del medio.
2º Metabolizan la glucosa por la vía fermentativa, que puede ser de dos tipos:

- Fermentación ácido mixta: los productos finales son ácidosorgánicos, que disminuyen el pH del medio, lo que se manifiesta con el Rojo de metilo.

- Fermentación butilén-glicólica: los productos finales, como butanodiol y etanol, son neutros y producen como intermediarios acetoina, que puede detectarse con el reactivo de Voges Proskauer, el react. A que es KOH, y el B alfa-naftol, estos reaccionan con la acetoina originando coloraciones violáceas

b)Objetivo de la prueba
Identificar las enterobacterias que usan la glucosa por oxidación o por fermentación.

c) Reacción química o base bioquímica





α-D-glucosa Ac. Piruvico Acetoina Diacetilo

Diacetilo + α-naftol +Arginina = Complejo de Color Rojo

d) Interpretación de resultados incluyendo imágenes
El desarrollo de color rojo 15 minutos o mas después de la adiciónde los reactivos, indica la presencia de diacetilo, el producto de la oxidación de la acetoina, constituyéndose así un resultado positivo.












e) Bibliografía
MacFaddin F. Jean, 2000, Prueba voges-proskauer, Pp. 411-422, En: Pruebas Bioquímicas para la Identificación de Bacterias de Importancia Clínica, 3º Edición, S. Rondinone & O. Giovanniello, Editorial Panamericana, BuenosAires Argentina

3.- CITRATO DE SIMMONS
a) Principio de la prueba
El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces deutilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio como únicafuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad

b) Objetivo de la prueba
Medio utilizado para la diferenciación de entero bacterias, en base a lacapacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.

c) Reacción química o base bioquímica
En el medio de cultivo el fosfato mono amónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono y ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es el co-factor enzimático. El clorurode sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino.

El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da...