PRUEBAS Bioquimicas Enterobacterias

PRUEBAS  BIOQUÍMICAS REALIZADAS
 A  ENTEROBACTERIAS
CATALASA
NITRITOS
CITOCROMO  OXIDASA
PRUEBA AMINO-ACIDOS (CALDO DESCARBOXILASA DE MOELLER)
CITRATO
ROJO DE METILO(RM)
(EOSINA-AZUL METILENO) EMB
SIM (SULFURO-INDOL-MOTILIDAD)
HECKTOEN-ENTERIC­O (HE)
SS (SALMONELLA SHIGELLA)
LIA ( LISINA-HIERRO)
TSI (TRES AZUCARES-HIERRO)
MALONATO
UREA
MAC CONKEY
VOGES PROSKAUER (VP)
MOTILIDAD
XLD (XILOSA-LISINA-DESOXICOLATO)
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 CATALASA
FUNDAMENTO
La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de Hidrogeno (H2O2) en agua y oxigeno. El peróxido de Hidrogeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo aerobio de los hidratos de carbono. Si se permite que se acumule resulta letal para la célula bacteriana.

La prueba de lacatalasa se usa con mucha frecuencia para diferenciar miembros de la familia Micrococaceae de miembros de la familia Streptococcaceae.
 
MATERIALES Y
REACTIVOS
*Peróxido de Hidrogeno al 3% almacenado en frasco ámbar en frío.
*Cultivo de 18-24 horas del microorganismo a probar
PROCEDIMIENTO
*Con un asa o palillo de madera, transferir parte del centro de una colonia  a la superficie de unportaobjetos
*Agregar 1 gota de Peróxido de Hidrógeno al 3% y observar la producción de burbujas
INTERPRETACION
 La producción rápida y sostenida de burbujas o efervescencia constituye una reacción positiva.

NOTA
Los eritrocitos poseen catalasa, por lo cual se debe evitar tomar colonias de agar sangre para evitar falsos positivos.

 


 ACTIVIDAD CITOCROMO-OXIDASA
 
FUNDAMENTO
Los citocromos sonHemoproteinas que contienen hierro y actúan como el último eslabón de la cadena respiratoria aerobia, transfiriendo electrones (Hidrogeno) al oxigeno, con formación de agua. El sistema citocromo se encuentra en los organismos aerobios o anaerobios facultativos, de modo que la prueba de Oxidasa es importante para identificar aquellos organismos que carecen de esta enzima (anaerobios obligados). La prueba esmuy útil para diferencia Enterobacterias (Todas Oxidasa negativas) de otras especies como Pseudomona  o Neisserias oxidasa positiva.
MATERIALES Y
REACTIVOS
Hay dos compuestos susceptibles a oxidarse por la acción de esta enzima, produciendo un color inicialmente rosado y luego azul oscuro a negro. Dichos compuestos son dimetil-fenil-diamina y tetrametil-parafenil-endiamina. Siendo el másutilizado el segundo, también se dispone en el mercado de tirillas de Oxidasa o el reactivo ya preparado.
INTERPRETACION
Las colonias bacterianas con actividad de Citocromo-Oxidasa en segundos toman un color azul intenso en el sitio de la prueba. Para esta técnica no se debe utilizar asas de acero inoxidable, dado que los productos de Oxidación formados al esterilizarlas a la llama pueden producirreacciones falsas positivas. Por lo cual debemos utilizar palillos de madera.

 

 
 
 
 
 

MAC CONKEY
 
FUNDAMENTO
Agar selectivo y diferencial para el aislamiento de Enterobacterias. El medio contiene sales biliares y cristal violeta que son inhibidores de la microbiota Gram positiva. La lactosa junto al indicador Rojo neutro sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar, dividiendoel grupo en 2: Bacterias fermentadoras y no fermentadoras de Lactosa.
 
TECNICA:
Sembrar en el agar realizando siembra por agotamiento a partir del cultivo del microorganismo en estudio. Incubar 24 horas a 37º C.
 
INTERPRETACION
Las colonias fermentadoras de lactosa dan un color rosado. Las colonias no fermentadoras de lactosa son incoloras, lo anterior por el comportamiento del indicador de pH. 

 
 
 

HECKTOEN-ENTERICO (HE)

FUNDAMENTO
El agar HE es un medio de cultivo selectivo para la identificación de bacterias intestinales patógenas. La alta concentración de sales biliares inhibe el desarrollo de las bacterias Gram positivas. La Fucsina acida junto con el azul de Bromotimol reaccionan virando a amarillo al bajar le pH del medio por la acción de los ácidos producidos a partir de...