Pruebas bioquimicas

1. Determine las reacciones químicas que se presentan por crecimiento bacteriano en los medios: KIA (TSI), CITRATO DE SIMMONS, INDOL, ESCULINA, CITOCROMO OXIDASA, ROJO DE METILO, UREA y VOGER-PROSKAUER.
RTA/
INDOL
El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofanocon producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la identificación de muchas especies de microorganismo.
La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo del reactivo de Kovacs descrito más adelante. El mediode cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.
ROJO DE METILO - VOGES-PROSKAUER (RM VP)
Productos de fermentación que se originan por la fermentación de la glucosa. Se conocen dos tipos generales: la fermentación ácido-mixta y la fermentación del 2,3 butanodiol. En la fermentación ácido mixta se forman fundamentalmente láctico, acético y succínico, además de etanol, H2 y CO2. En la vía delbutanodiol se forman cantidades menores de ácido (acetato y succinato) y los principales productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2.
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo de viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la producción de ácidos por la vía de fermentación ácido mixta. El acetil-metil-carbinol (o acetoína) es un producto intermediarioen la producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la acetoína es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.
UTILIZACION DE CITRATO
La utilización de citrato como única fuente de carbono es una prueba útil en la identificación de enterobacterias.
La utilización de citrato como única fuente de carbono se detecta en unmedio de cultivo con citrato como única fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinización del medio. Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6.

TSI (TRIPLE SUGAR IRON)
El agar triple azúcar hierro es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa ylactosa en un único medio. También permite la detección de la producción de H2S. Es un medio útil para la identificación de enterobacterias.
El agar se prepara en forma de pico de flauta. Esto determina que existan dos cámaras de reacción dentro del mismo tubo. La porción inclinada (pico) expuesta en toda su superficie al oxígeno es aerobia y la porción inferior (fondo) está protegida del aire yes relativamente anaerobia. Al crecer en el TSI, el pico tiende a virar al pH alcalino (color rojo por el rojo fenol) por la producción de aminas, debido a la utilización aerobia de las peptonas. En el fondo del tubo -donde no hay oxígeno- la degradación de peptonas es menor y no se generan aminas, de manera que se pueden detectar la producción de pequeñas cantidades de ácido (color amarillo porel rojo fenol). Si se inoculan microorganismos no fermentadores no se formarán ácidos, pero por la producción de aminas en el pico, todo el medio quedará rojo. La glucosa en el TSI está en una proporción 10 veces menor que la lactosa y la sacarosa. Si el TSI es inoculado con una bacteria fermentadora de glucosa pero no de lactosa ni de sacarosa, la cantidad de ácido producida por fermentación serábaja (porque la cantidad de glucosa inicial es baja). En las primeras horas (10 a 16 hs) de incubación se producirá viraje del indicador al amarillo en todo el tubo (pico y fondo), pero al continuar la incubación, el pico del tubo retornará al rojo por la producción de aminas debida a la degradación aerobia de las peptonas antes descrita. Si el microorganismo fermenta la lactosa y/o la sacarosa,...