Pruebas bioquimicas

Propiedades Bioquímicas

En la industria alimentaria es de vital importancia el control de microorganismos en lo que respecta a aseguramiento de la calidad y seguridad del consumidor.
Es por esto que se deben aplicar diversas pruebas bioquímicas que permitan reconocer e identificar bacterias patógenas para éste, como lo son aquellas pertenecientes a la familia Enterobacteriacea.
Las pruebas oensayos bioquímicos, son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar de forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc.
Generalmente estas pruebas bioquímicas determinan laactividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato, que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no, por ejemplo la ausencia de una determinada enzima puede impedir esa transformación o al menos la retardará.
Es importante señalar que existe una extensa variedad de pruebas bioquímicas, por lo que es necesario precisar en lasmás asertivas al momento de efectuar un análisis microbiológico en los alimentos, es por esto, que en el presente práctico, se realizaran las siguientes pruebas:

- Prueba de la Coagulasa
- Prueba de la Oxidasa
- Prueba de la Catalasa
- Prueba IMViC: Producción de indol, reacción rojo metilo y utilización de citrato.
- Pruebas en medio MIO: Movilidad, Descarboxilación de la ornitina yProducción de indol
- Pruebas en agar TSI: Fermentación de azúcares y producción de ácido sulfhídrico y gas; y agar LIA: Descarboxilación, desaminación de la lisina y producción de ácido sulfhídrico y gas.

Para realizar las pruebas anteriormente descritas, se analizarán un número de 6 cepas bacterianas: Enterococos, Escherichia coli, Pseudomona spp., Salmonella, Shigella y Staphylococcus aureuspara luego interpretar las reacciones generadas de cada una.

➢ Pruebas Bioquímicas (Fundamentos)

1. Prueba de la Coagulasa:

La coagulasa es una enzima que tiene la facultad de coagular las proteínas séricas del plasma de organismos, siendo estos animales o humanos.
La coagulación se produce porque la enzima reacciona con el fibrinógeno del plasma.
El objetivo de esta pruebaes diferenciar de manera específica Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de especies de Staphylococcus (coagulasas negativos), mediante el factor de aglutinación.
El mecanismo de acción de la coagulasa libre es que la procoagulasa (enzima extracelular bacteriana) reacciona con un factor activador presente en el plasma sanguíneo similar a la protrombina, dando lugar a un complejoanálogo a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona con fibrinógeno formando un coágulo de fibrina en ausencia de Ca2+.
Una prueba coagulasa positiva será entonces la formación de una aglutinación en el medio.
2. Prueba de la Oxidasa

La oxidasa es una enzima que cataliza una reacción de oxidación/reducción empleando oxígeno molecular (O2) como aceptor de electrones.
En estasreacciones el oxígeno se reduce a agua (H2O) o a peróxido de hidrógeno (H2O2).
Esta prueba se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo C. La principal excepción es Streptococcus.
El test para esta prueba es indirecto a través de discos de papel que se impregnan conparafenilandiamina (reactivo de oxidasa). En este caso, los microorganismos que producen la enzima oxidasa se evidenciaran por presencia de oxígeno atmosférico y citocromo C, oxidándose el sustrato presente en los discos a un compuesto de color púrpura-negruzco, dictaminando así la prueba oxidasa positiva. En cambio, en los discos donde no se aprecie una coloración definida, se dictamina la prueba como...