pruebas bioquimicas

Pruebas Bioquímicas
Determinan la actividad metabólica de una cepa pura. Son
empleadas principalmente para la identificación y
clasificación de bacterias y hongos.

Pruebas Bioquímicas

E + S ↔ ES ↔ E + P
Se pueden resumir en los siguientes puntos:

•Sustrato (contenido en el medio de cultivo)
•Enzima o vía metabólica (secretada o en el interior del
microorganismo)

•Producto•Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean)

Los fundamentos completos de estas pruebas y demás información pueden
encontrarlos en el libro: Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias
de importancia clínica de Jean F. MacFaddin, Editorial Médica Panamericana.

Hidrólisis del Almidón

Prueba negativa

Prueba positiva

El almidón es producido
principalmente porplantas superiores, está
compuesto de amilosa y
amilopectina. Diversas
enzimas amilolíticas
hidrolizan almidón y sus
productos.

Agar Almidón
Sustrato: Almidón (polímero de glucosa).
Enzima: Amilasa (exoenzima).
Producto: Glucosa.
Revelador: Lugol.
Fundamento: El lugol con el almidón forman un complejo
color café-púrpura que desaparece cuando el almidón ha
sido degradado.Degradación de la caseína
Agar Leche Descremada
Sustrato: Caseína (proteína).
Enzima: Caseinasa (Proteasa,
exoenzima).
Producto: Aminoácidos.
Revelador: No requiere.

Prueba negativa

Prueba positiva

Fundamento: Las proteasas son excretadas al medio para la
degradación de proteínas, la caseína es la proteína de la leche
que le confiere el color blanco, cuando la caseína es hidrolizadadesaparece el color blanco alrededor del crecimiento
microbiano.

Hidrólisis de la lecitina y
reducción del telurito
Agar yema de huevo/Agar Baird Parker
Sustrato: Lecitina.
Enzima: Lecitinasa.
Producto: Fosforilcolina.
Revelador: No requiere.
Algunos microorganismos producen lecitinasa que hidroliza la
lecitina (fosfolípido). Se utiliza el agar yema de huevo. Las colonias
productoras delecitinasa forman una zona opaca a su alrededor.
El medio de Baird Parker es empleado para el aislamiento y
cuantificación de estafilococos coagulasa positivos, al que se
adicionan componentes que lo hacen selectivo. Las colonias
típicas de S. aureus son oscuras por la reducción del telurito,
además presentan el halo de hidrólisis de la lecitina.

Licuefacción de la gelatina
GelatinaNutritiva
Sustrato: Gelatina (proteína).
Enzima: Gelatinasa (Proteasa,
exoenzima).
Producto: Aminoácidos.
Revelador: No requiere o puede
emplearse el carbón activado en
polvo.
Prueba negativa

Prueba positiva

La gelatina es una proteína que tiene la capacidad de gelificar,
cuando es hidrolizada por la gelatinasa en los aminoácidos que la
componen pierde su característica de gelificar. Sepueden
emplear varios medios que permiten la visualización
macroscópica como la gelatina adherida a carbón activado.

Fermentación de carbohidratos
Medio base rojo de fenol más
carbohidrato o polialcohol, con
campana de fermentación (Durham).
Sustrato: Carbohidrato o polialcohol.
Vía: Fermentativa.
Producto: Ácidos orgánicos.
Indicador: Cualquier indicador de pH.Negativo/Positivo(A)/Positivo(AG)

Los compuestos de carbono (carbohidratos o polialcoholes)
deben ser incorporados, algunos requieren de ser degradados
en monómeros y transportados a la célula para posteriormente
en condiciones anaerobias ser metabolizados por la vía
fermentativa. La fermentación (degradación) de un compuesto
orgánico se observa por la acidez en el medio de cultivo y la
formación de gascapturado en la campana de fermentación.

Oxidación/Fermentación
Hugh and Leifson
Sustrato: Carbohidratos.
Vías: Fermentativa y/u Oxidativa.
Producto: Acido pirúvico.
Indicador: Azul de bromotimol u
otro indicador ácido/base.
Las bacterias utilizan hidratos de carbono por uno de dos procesos
metabólicos, fermentativo u oxidativo. La principal diferencia es la
necesidad de oxígeno...