pruebas bioquimicas

ciencias Pruebas Bioquímicas
Determinan la actividad metabólica de una cepa pura. Son
empleadas principalmente la identificación y clasificación
de bacterias y hongos. Pruebas Bioquímicas
Se pueden resumir en los siguientes puntos:
•Sustrato (contenido en el medio de cultivo)
•Enzima o vía metabólica (secretada o en el interior del
microorganismo)
•Producto•Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean)
E + S ↔ ES ↔ E + P ↔ ES ↔ E + P
Los fundamentos completos de estas pruebas y demás información pueden
encontrarlos en el libro: Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias
de importancia clínica de Jean F. MacFaddin, Editorial Médica Panamericana.Hidrólisis del Almidón
Agar Almidón
Sustrato: Almidón (polímero de glucosa).Enzima: Amilasa (exoenzima).
Producto: Glucosa.
Revelador: Lugol.
El lugol con el almidón forman un complejo color café-púrpura
que desaparece cuando el almidón ha sido degradado.
El almidón es producido
principalmente por
plantas superiores, está
compuesto de amilosa y
amilopectina. Diversas
enzimas amilolíticas
hidrolizan almidón y sus
Prueba negativa Prueba positivaproductos.Degradación de la caseína
Prueba negativa Prueba positiva
Agar Leche Descremada
Sustrato: Caseína (proteína).
Enzima: Caseinasa (Proteasa,
exoenzima).
Producto: Aminoácidos.
Revelador: No requiere.
Las proteasas son excretadas al medio para la degradación de
proteínas, la caseína es la proteína de la leche que le confiere el
color blanco, cuando la caseína es hidrolizada desaparece elcolor blanco alrededor del crecimiento microbiano.Hidrólisis de la lecitina y
reducción del telurito
Algunos microorganismos producen lecitinasa que hidroliza la
lecitina (fosfolípido). Se utiliza el agar yema de huevo. Las colonias
productoras de lecitinasa forman una zona opaca a su alrededor.
El medio de Baird Parker es empleado para el aislamiento y
cuantificación de estafilococoscuagulasa positivos, al que se
adicionan componentes que lo hacen selectivo. Las colonias
típicas de S. aureus son oscuras por la reducción del telurito,
además presentan el halo de hidrólisis de la lecitina.
Agar yema de huevo/Agar Baird Parker
Sustrato: Lecitina.
Enzima: Lecitinasa.
Producto: Fosforilcolina.
Revelador: No requiere.Licuefacción de la gelatina
Gelatina NutritivaSustrato: Gelatina (proteína).
Enzima: Gelatinasa (Proteasa,
exoenzima).
Producto: Aminoácidos.
Revelador: No requiere o puede
emplearse el carbón activado en
polvo.
La gelatina es una proteína que tiene la capacidad de gelificar,
cuando es hidrolizada por la gelatinasa en los aminoácidos que la
componen pierde su característica de gelificar. Se pueden
emplear varios medios que permitenla visualización
macroscópica como la gelatina adherida a carbón activado.
Prueba negativa Prueba positivaFermentación de carbohidratos
Medio base rojo de fenol más
carbohidrato o polialcohol, con
campana de fermentación (Durham).
Sustrato: Carbohidrato o polialcohol.
Vía: Fermentativa.
Producto: Ácidos orgánicos.
Indicador: Cualquier indicador de pH.
Los compuestos de carbono(carbohidratos o polialcoholes)
deben ser incorporados, algunos requieren de ser degradados
en monómeros y transportados a la célula para posteriormente
en condiciones anaerobias ser metabolizados por la vía
fermentativa. La fermentación (degradación) de un compuesto
orgánico se observa por la acidez en el medio de cultivo y la
formación de gas capturado en la campana de fermentación....