pruebas bioquimicas

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

INDOL
Introducción

El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido
triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de
hidrolizar y desaminar el triptofano conproducción de indol, ácido pirúvico y
amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la
identificación de muchas especies de m.o.

Principio

La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando
el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído.
Este es el principio activo del reactivo de Kovacs descrito más adelante. Elmedio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.

Medios y reactivos
Caldo triptofano

Peptona o digerido pancreático de caseína
Cloruro de sodio

0,5 g

Agua destilada

100 ml

Reactivo de Kovacs

Alcohol amílico o isoamílico

150 ml

p-dimetilaminobenzaldehído

10 g

HCl conc.

2g

50 ml

Procedimiento

Inocular el caldo triptofano con el m.o. en estudio eincubar a 35°C durante
18 a 24 horas. Al finalizar este período, añadir 5 gotas de reactivo por la
pared interior del tubo.
Interpretación

El desarrollo de un color rojo intenso en la interfase del reactivo y el caldo,
segundos después de añadir el reactivo indica la presencia de indol y un
resultado de la prueba positiva.

Controles
Escherichia coli: positivo
Klebsiella pneumoniae:negativo (mayoría de las cepas)

ROJO DE METILO - VOGES-PROSKAUER (RM VP)
Principio

Una de las características taxonómicas que se utilizan para identificar los
diferentes géneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporción
de productos de fermentación que se originan por la fermentación de la
glucosa. Se conocen dos tipos generales: la fermentación ácido-mixta y lafermentación del 2,3 butanodiol. En la fermentación ácido mixta se forman
fundamentalmente láctico, acético y succínico, además de etanol, H2 y CO2.
En la vía del butanodiol se forman cantidades menores de ácido (acetato y
succinato) y los principales productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2.
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo de viraje entre 6,0
(amarillo) y 4,4 (rojo), que seutiliza para visualizar la producción de ácidos
por la vía de fermentación ácido mixta.
El acetil-metil-carbinol (o acetoína) es un producto intermediario en la
producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la
acetoína es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol
dando un color rojo-fucsia

Medios y reactivos
Caldo RM/VP

Peptona

7gGlucosa

5g

Fosfato dipotásico 5 g
Agua destilada

1L

pH = 6,9 ± 0,1

Indicador de pH rojo de metilo

Rojo de metilo

0,1 g en 300 mL de etanol 95°

Agua destilada

200 ml

Revelador VP

alfa-naftol (solución al 5% en etanol 95°)
Solución de KOH al 40% en agua destilada

Procedimiento

Inocular el caldo RMVP con un cultivo puro de no más de 24 horas del m.o.
enestudio. Incubar a 35°C durante 48 horas. Luego de finalizado el tiempo
de incubación transferir 1 mL del caldo a un tubo limpio para VP. En el caldo
restante revelar RM agregando unas 4 - 8 gotas del indicador rojo de metilo.
Para revelar VP agregar 0,6 ml (10 gotas) de alfa-naftol al 5% y 1 gota de
KOH al 40%. Agitar cuidadosamente para exponer el medio al oxígeno
atmosférico y dejarlo reposardurante 10 a 15 minutos.

Interpretación

La prueba RM es positiva si se desarrolla un color rojo estable. Esto indica
que la producción de ácido es suficiente para producir el viraje del indicador
y el m.o. fermentó la glucosa por la vía de ácido mixta. Un color anaranjado,
intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.
La prueba VP es positiva si se desarrolla...