Pruebas bioquimicas

Oxidasa

Introducción: La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromo-oxidasa que activa la oxidación del citocromo, reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor final de electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromo-oxidasasólo se encuentra en los organismos aerobios, algunos anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algún microaerófilo, pero los anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa. Asimismo, la presencia de oxidasa va ligada a la producción de catalasa, ya que ésta degrada el peróxido de hidrógeno que se produce como consecuencia de la reducción del oxígeno y cuya acumulación es tóxica.Objetivo: Determinar la presencia de enzimas oxidasas.

Desarrollo:
1-. Agregar directamente 2-3 gotas de reactivo a algunas colonias. No inundar toda la placa y no invertirla.
2-. Observar los cambios de color. Con el reactivo de Kovacs la reacción se produce en unos 10-15 segundos, mientras que con el de Gordon y McLeod es dentro de los 10-30 minutos.

Identificación e interpretación deresultados:
Las bacterias que dan positivo a esta prueba tienen generalmente un ciclo respiratorio oxidativo.

Se considera positva esta prueba cuando toma un color púrpura la muestra.

(+) Pseudomonas aeruginosa
( - ) Escherichia coli

Bibliografía:
http://html.rincondelvago.com/pruebas-bioquimicas.html

Kingler, hierro y triple azúcar

Introducción: Es un medio nutriente y diferencial quepermite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un único medio. También permite la identificación de la producción de SH2.

Objetivo: Identificación a nivel de género en la familia Enterobacteriaceae, con objetivo de diferenciar entre:
* bacterias fermentadoras de la glucosa
* bacterias fermentadoras de la lactosa
* bacteriasfermentadoras de sacarosa
* bacterias aerogénicas
* bacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgánicas que contengan azufre.
Desarrollo:
Inocular los tubos de TSI con punta (alambre recto). Para eso introducir la punta hasta 3 a 5 mm del fondo del tubo. Tras retirar el alambre del fondo, estriar el pico con un movimiento hacia uno y otro lado. Incubar a 35° durante 24 horas.Posteriormente se debe medir el pH de los cultivos.

Identificación e interpretación de resultados:
* Pico alcalino/fondo alcalino: no hay fermentación de azucares. Característica de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas sp.
* Pico alcalino/fondo ácido: Glucosa fermentada, lactosa ni sacarosa fermentadas. Shigella spp.
* Pico alcalino/fondo negro: Glucosa fermentada, ni lactosa nisacarosa fermentadas, producción de ácido sulfhídrico. Salmonela spp.
* Pico ácido/fondo ácido: Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse SH2 o no. Escherichia coli.

A estos resultados se les agrega el resultado de la producción de gas

Bibliografía:
http://html.rincondelvago.com/pruebas-bioquimicas.html

Ureasa

Introducción: Esta enzima hidroliza la urea(H2N-CO-NH2) y origina amonio, lo que producirá un incremento del pH que puede detectarse con un indicador.

Esta actividad enzimática es característica de todas las especies de Proteus y se usa, sobre todo, para diferenciar este género de otras enterobacterias que dan negativo o positivo retardado.

Objetivo: Determinar la capacidad de un organismo de desdoblar la urea, formando dos moléculas deamonio por acción de la enzima ureasa.

Desarrollo:
Se cultiva el microorganismo en agar urea de Christensen. Este medio se complementa después del autoclavado con 50ml/l de urea. Ésta será degradada por aquellos microorganismos capaces de producir el enzima ureasa.

Identificación e interpretación de resultados:
La degradación produce amoniaco que hará variar el color del indicador de...