Pruebas Bioquimicas

Pruebas Bioquímicas
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria alcrecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
De la amplia variedad de pruebas bioquímicas, nosotros en laboratorio utilizaremos 10, aplicados a 5 especies de microorganismos.
Las pruebas a estudiar son las siguientes:
1. Prueba de Catalasas
2. Prueba deUreasa
3. Prueba de Oxidasa
4. Prueba de Coagulasa
5. Producción de Hemolisinas
6. Prueba de Citrato
7. Prueba de Indol
8. Prueba de Movilidad
9. Ácido Sulfúrico
10. Voges Proskauer VP
11. Rojo de Metilo MR
12. Triple Azucar y Hierro

Prueba de Catalasa
Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayoría de lasbacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo
Objetivo. Separar los Staphylococcus (catalasa +) de los Géneros Streptococcus y Enterococcus (catalasa-).
Fundamento. En los ambientes acuosos, que contienen oxígeno disuelto, como el citoplasma de las células, aparecen formas tóxicas derivadas del oxígeno. Las bacterias que viven en ambientes aerobios necesitan un equipo enzimáticocapaz de neutralizar estas formas tóxicas. Entre estas enzimas se encuentra la catalasa, que convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular.
Reactivo. Peróxido de hidrógeno al 3%: Se prepara con peróxido de hidrógeno y agua destilada. Este es un reactivo muy inestable que cuando se expone a la luz se descompone fácilmente. Debe almacenarse en refrigeración y en botella colorámbar. Además justo cuando se va a usar debe revisarse que dé bien con los controles de calidad.
Son ejemplos de catalasa positivo Escherichia coli y catalasa negativo Enterococcus faecalis.
PRUEBA EN LÁMINA.
a) Con una aguja bacteriológica o un aplicador estéril, pique el centro de una colonia bien aislada y transfiera el inóculo a un portaobjeto limpio.
b) Añada 1 o 2 gotas de peróxido al3%.
c) Observe si se forman burbujas (resultado positivo) o no inmediatamente después que se añade el reactivo.
d) Descarte la lámina en un recipiente con desinfectante.
MÉTODO EN PLATO O TUBO CON AGAR.
a) Añada unas gotas del peróxido de hidrogeno al 15% directamente sobre la superficie donde hay crecimiento.
b) Observe si se forman o no burbujas de inmediato.
Originariamente,esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes géneros:
* Streptococcus (-) de Micrococcus y/o Staphylococcus (+).
* Bacillus (+) de Clostridium (-).
* Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+), con las excepciones de C.pyogenes y C.haemolyticum, ambos (-) de Erysipelothrix (-)
Prueba de Ureasa
No es una prueba de gran costo y permite en corto tiempo (hastauna hora) obtener el diagnostico. La prueba de ureasa permite detectar la ureasa producida por el microorganismo directamente, a partir de muestras de biopsia obtenidas por endoscopia, gracias a un detector de pH.
Las pruebas más utilizadas basadas en la ureasa son el CLO-test, el caldo de urea Christensen y las soluciones de urea a concentraciones variables, todas ellas con sensibilidad yespecificidad elevadas.
Esta actividad enzimática es característica de todas las especies de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este género de otras enterobacterias que dan negativo o positivo retardado.
Se cultiva el microorganismo en slant en agar urea de Christensen. Este medio se complementa después del autoclavado con 50ml/l de urea. Ésta será degradada por aquellos microorganismos...