Pruebas Bioquimicas

PRUEBAS BIOQUIMICAS´
Oxidasa
Prueba utilizada para la detección de la enzima citocromo-c-oxidasa, presente en los géneros Pseudomonas, Neisseria, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre otros.
Los discos contienen oxalato de dimetil-para-fenilendiamina, el cual es el sustrato de la enzima oxidasa. Los microorganismos que producen la enzima oxidasa se evidencian porque en presencia de oxígenoatmosférico y citocromo c, se oxida el sustrato presente en los discos a un compuesto de color rojo-fucsia. Lactosa Esta prueba se usa para diferenciar entre las enterobacterias en general y el grupo de las coliformes. Se trata por tanto de una prueba de gran importancia debido a que los coliformes se utilizan como organismos indicadores de contaminación fecal en análisis, sobre todo, de aguas. Unamanera sencilla de realizar la prueba de la fermentación de la lactosa en enterobacterias es sembrar el microorganismo en agar McConkey, ya que este medio, además de selectivo frente a bacterias no entéricas, es diferencial ya que contiene lactosa y un indicador de pH (rojo neutro).
En agar McConkey las bacterias Gram positivas ven inhibido su crecimiento debido a la presencia de sales biliaresy cristal violeta y sólo crecerán las enterobacterias, pero entre ellas las que fermenten la lactosa (coliformes) liberarán productos ácidos que producirán un cambio de pH que se detectará gracias al rojo neutro. Las colonias lactosa (+) aparecerán de color rojo o violeta contrastando con la coloración amarillenta de las colonias lactosa (-).
Manitol-Movilidad-Nitratos

Prueba del Manitol Sirvepara detectar si los gérmenes son capaces de fermentar el manitol liberando productos ácidos que serán detectados gracias al indicador rojo de fenol que cambiará a color amarillo. Para esta prueba el medio manitol movilidad incluye 7,5 g/l de D-Manita. Bacterias manitol (-) son, dentro de las enterobacterias, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris y Shigella dysenteriae. Entre las bacterias deimportancia clínica, la prueba del manitol sirve para diferenciar Staphylococcus aureus (+) de Staphylococcus epidermidis (-).
Prueba de la Movilidad
Sirve para determinar si un organismo es móvil o inmóvil. Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos que se encuentran principalmente entre los bacilos aunque existen algunas formas de cocos móviles.

Prueba de la reducción de nitratosSirve para determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos. Para ello, el medio manitol movilidad incorpora 1 g/l de potasio nitrato y para revelar la presencia de nitritos después de su incubación se añaden los reactivos A y B de Griess-Ilosvay en cantidades iguales (1ml aprox.). Un cambio de color (rojo) dentro de los 30 seg indica prueba completa con resultadopositivo. Si no cambia de color, se agrega directamente al tubo una pizca (unos 20mg) de polvo de cinc purísimo, totalmente exento de nitratos o nitritos, y se observa el cambio de color durante otros 30 seg, al cabo de los cuales se realiza la interpretación final.

CATALASA:
La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de hidrogeno (H2O2) en agua y oxigeno. Químicamente, es una hemoproteinade estructura similar ala hemoglobina, salvo porque los cuaro atomos de hierro de su molecula están en esta oxidado (fe3) en lugar de en estado reducido (fe). Excepto los estreptococos, la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen actividad catalasa.
El eroxido de hidrogeno se forma como uno de los productos finales de oxidación del metabolismo aerobio de los hidratosde carbono. Si se permite que se acumule, resulta letal para las células bacterianas. La catalasa convierte el peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno según la siguiente reacción
2H2O2 2H2O O2 (burbujas de gas)
La prueba de la catalasa se usa con mucha frecuencia para diferenciar los miembros de la familia Micrococcaceae de los miembros de la familia Streptococcaceae.
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