Pruebas bioquimicas

Universidad de Santiago de Chile
Facultad Tecnológica
Departamento de Ciencias y Tecnología en Alimentos










Práctico N°8:

“Pruebas Bioquímicas”

















Introducción.
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales conocida su reacción, nos permiten identificar yclasificar distintos microorganismos presentes, ya sea tanto como características fenotípicas como también genotípicas. Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se añade en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciarbacterias. Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azúcares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de compuestos coloreados, etc. Estas características son visualizadas por el cambio de color, presencia o ausencia de burbujas, etc [1]. Por dicho motivo en el práctico se llevo a cabo diversas pruebas bioquímicas donde seutilizó diferentes sistemas de trabajo (medios de cultivo, indicador, revelador, etc.) como se muestra a continuación.


Objetivos.
• Aplicar pruebas bioquímicas para la identificación de diferentes bacterias.

Resultados.
1. Prueba IMVIC: Se inoculó tres bacterias tales como; Escherichia coli, Salmonellatyphimurium y E.coli sospechosa, en los caldos Producción de indol en el que se agregó al tubo 2-3 gotas del reactivo de Kovacs, Rojo de metilo en el que se agregó gotas de solución rojo metilo,Voges-Proskauer en el que se agregó al tubo 0,6 mL de α-naftol al 5% y 0,2 mL de KOH al 40% y Utilización de citrato. Los resultados obtenidos se muestran en la siguiente tabla y en las imágenes 1, 2, 3 y 4 quese encuentran en el anexo.



Bacteria
I
M
V
C
E.coli
+
+
-
-
E.coli sospechosa
+
+
-
-
S. typhimurium
-
-
-
+
Tabla 1. Resultado de la prueba bioquímica IMVIC.
2. Pruebas en agar hierro-tres azúcares (TSI), pruebas en agar hierro-lisina (LIA) y Prueba MIO. Se inoculó tres tipos de bacterias (E.coli, Shigella sp, S. typhimurium) en los medios de cultivodiferente. Los resultados obtenidos se muestran en la siguiente tabla y en las imágenes 5, 6 y 7 que se encuentran en anexo.
Tabla 2. Resultado de las pruebas bioquímicas en medio TSI, LIA Y MIO.

3. Prueba de coagulasa: Se utilizó un cultivo de Staphylococcus. aureus en caldo cerebro corazón. El resultado obtenido fue coagulasa positiva (+3) que se muestra en la imagen 8 que se encuentra en elanexo.

4. Prueba de citocromo oxidasa. Se utilizaron tiras de papel filtro previamente impregnadas con el reactivo NN-dimetil-p-fenilendiamina y se depositaron en una placa que contenía las bacterias .Cada bacteria presentó oxidasa positiva y se logró identificar en el cambio de color del papel filtro, el cual se interpretó por un color púrpura (Imagen 9 -10).

5. Prueba de lacatalasa: Se depositó una porción de cada bacteria a analizar en un portaobjetos y se le agregó una gota de agua oxigenada. Cada bacteria que se utilizó, presentó un burbujeo y se interpretó como catalasa + y las que no catalasa - . Los resultados obtenidos pueden corroborarse en la siguiente tabla 3 y en las imágenes 11 y 12 que se encuentra en el anexo.


E.coli
Pseudomona sp
Listeriamonocytogenes
S. typhimurium
Staphylococcus aureus
Shigella sp
Klebsiella sp
Streptococcus sp
Bacillus cereus
S.choleraesuis
Catalasa
+
+
+
+
+
-
+
-
+
-
Tabla 3. Resultados de prueba de catalasa.

Discusión.
1. Pruebas IMVIC: Mediante estas pruebas, se logró identificar especies de coliformes en diferentes medios de cultivo, para indol...