pruebas bioquimicas

Universidad Nacional Experimental Simón Rodríguez
Núcleo “Félix Adam”. Canoabo
Ingeniería de Alimentos
Microbiología General
Facilitadora:
Judith González
Participantes:
Astrid Morales
20.968.559
Luis Bahachille
25.427.375
PRUEBAS BIOQUIMICAS

Consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida reacción, nos permiten identificardistintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo enestudio.


CUADRO REPRESENTATIVO DE METODOS Y DEFINICIONES DE PRUEBAS BIOQUIMICAS
TECNICA
FUNDAMENTOS
PROCEDIMIENTOS
RESULTADOS





Prueba de la Oxidasa
Se trata de una enzima que oxida el citocromo C de la cadena transportadora de e-. Este se detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la citocromo Coxidasa. En estado reducido es incolora, pero cuando se oxida vira a púrpura.

Con un pequeño papel de filtro añadimos reactivo de Kovac, lo impregnamos y a partir del tubo con la bacteria problema tomamos un poco con el asa de platino y ponemos en el papel. Tras unos 30 segundos, observamos si ha ocurrido algún cambio.

(+) Pseudomonas aeruginosa
( - ) Escherichia coli





Prueba de laCatalasa

El Objetivo es buscar la presencia de la enzima catalasa.
El peróxido de hidrógeno se produce al utilizar la bacteria el azúcar por vía oxidativa. Al ser éste un compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan mediante la producción de la enzima catalasa (H2O2 -> H2O + ½ O2).

Agregamos aproximadamente 5 ml. de peróxido de hidrógeno al 3% a un tubo de ensayo previamenteesterilizado a continuación tomamos una muestra de la cepa del microorganismo a estudiar y la introducimos por el tubo de ensayo, la muestra solamente debe acercarse a la muestra de la solución líquida de peróxido de hidrogeno y debemos observar la reacción de esta.
(+) Staphylococcus aureus
( - ) Streptococcus spp.


TECNICA
FUNDAMENTOS
PROCEDIMIENTOS
RESULTADOS







Prueba de laCoagulasa
La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la bibrina del plasma. El objetivo es buscar en factor de aglutinación de los microorganismos cuando estos se mezclan con el plasma. Esta prueba se utiliza para diferenciar microorganismos del genero Staphylococcus.
Preparamos una mezcla de 0,1 ml. de CCC (caldo cerebro corazón) y 0,3 ml. de plasma de conejo en un tubo de ensayo previamenteesterilizado. La muestra ya contiene cepas de St. Aureus. Tapamos el tubo de ensayo con algodón hidrofílico y lo llevamos a baño María a 37° C durante una hora, observando la muestra cada 15 minutos. Al completa la hora, sacamos las muestras y observamos sus resultados.

(+) Staphylococcus aureus
( - ) Staphylococcus epidermis.






Prueba MIO (Motility-Indole-Ornitine óMotilidad-Indol-Ornitina)
Esta prueba bioquímica permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la reacción de Indol a la descarboxilación de la ornitina.

Inocular en picada las cepas de microorganismos en el medio de cultivo e incubar por 24 horas a 37°.

1. Enturbiamiento del agar – hay movilidad.
2. Agar transparente desarrollo solo en picada – no hay movilidad
3. Azul ( Alcalino ) –Descarboxila omitina
4.Coloracion Amarilla ( acido) – no descarboxila



TECNICAS
FUNDAMENTOS
PROCEDIMIENTOS
RESULTADOS








Prueba TSI (Triple Sugar Iron ó Triple Azúcar Hierro)
El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un único medio. También permite la identificación...