Pruebas Bioquimicas

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Objetivos

* Ser capaces de entender e interpretar los resultados de las pruebas bioquímicas
* Identificar qué tipo de microorganismos tenemos en nuestros cultivos (por medio de las pruebas bioquímicas)

Introducción
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permitenidentificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo enestudio. Algunos de los que utilizamos fue el de Catalasa, Hidrólisis de almidón y utilización de carbohidratos.

La prueba de la catalasa tiene como objetivo identificar la existencia de esta enzima. El peróxido de hidrógeno o agua oxigenada se produce al utilizar la bacteria el azúcar por vía oxidativa. Al ser éste un compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan mediante la producción dela enzima catalasa para lo que la prueba es positiva si luego de la adición de la solución de peróxido de hidrógeno al 30% se observa efervescencia. La prueba es negativa si no se observa nada.

La prueba de hidrólisis de almidón es una prueba que tiene como objetivo identificar amilasa en la bacteria. Para reconocerla, en el laboratorio se cultiva en un medio de almidón y se deja a incubar.Al crecimiento de la bacteria se le agrega una solución de lugol. El almidón es un carbohidrato complejo que es degradado por microorganismos que contienen amilasas por lo que sí es positiva se formara un halo más claro alrededor de la bacteria y será negativo si no hay un cambio.

Utilización de carbohidratos En este caso el término fermentación se refiere al término degradación anaeróbica decarbohidratos, ya que estos almacenan gran cantidad de energía, la capacidad de fermentar depende de las enzimas del microorganismo. En esta prueba se considera positiva si hay crecimiento y negativa si no lo hay. Observa si el medio cambió de color. Para esta prueba se necesitan medios específicos que constan de lactosa, glucosa, fructosa, manosa, etc.

Resultados

1. Prueba de la catalasaNombre del cultivo | Reacción a la prueba de catalasa |
BNC | Poco Positivo |
Yak-3 | Negativo |
BNF | Contaminada no aplica a prueba |
BR | Negativo |
BN1 | Positivo |
MB | Súper positivo |
BA | Positivo |
BB | Positivo |
Yak-2 | Positivo |
Yak-3b | Súper positiva |
Copo de nieve | Positiva |
Yak-3ª | Negativa |
Yak-1 | Poco positiva |

Esta prueba consiste enagregar peróxido de hidrogeno y observar si hay efervescencia (burbujeo) en la prueba, de ser así la prueba es positiva, si no presenta efervescencia es negativa, de acuerdo con nuestros resultados.
Las bacterias que son superpositivas fueron debido a que inmediatamente al entrar en contacto con el peróxido surgió efervescencia y esta fue abundante las bacterias con estas características son, ManchaBlanca(MB), Yakult-3b (Yak-3b); las bacterias que fueron positivas fueron Bolita Naranja Claro (BNC), Bolita Naranja 1 (BN1), Bolita Amarilla (BA), Bolita Blanca (BB), Yakult-2 (Yak-2), Copo de nieve,Yakult-1(yak-1); las únicas bacterias en las que no se observo efervescencia fueron Yakult-3ª, Bolita Roja (BR), Yakult-3 (Yak-3) y en el caso de Bolita Naranja Fuerte (BNF) no se pudo analizardebido a que se contamino.

2. Hidrólisis del almidón
Nombre del cultivo | Reacción a la hidrólisis del almidón |
Yakult-3b | Súper positiva |
Yakult-2 | Muy positiva |
BN | Muy positiva |
Copo de nieve | Muy positiva |
BA | Positiva |
BNC | Negativo |
Yak-3a |...