Pruebas Bioquimicas

PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA ENTEROBACTERIAS

La familia Enterobacteriaceae está formada por bacilos gramnegativos aerobios, anaerobios facultativos, no esporulados. Todas las especies son oxidasa negativos, reducen nitratos a nitritos y fermentan glucosa. Pueden ser móviles o inmóviles. Se encuentran en la flora normal del tracto digestivo del hombre y animales.
Son bacterias poco exigentes,sobreviven en el ambiente, contaminan agua y alimentos y crecen en medios de cultivo comunes.
El diagnóstico es fundamentalmente directo, mediante cultivo e identificación. Crecen bien en medios de cultivo comunes (agar sangre) y selectivos (agar McConkey) y una vez obtenido el crecimiento de colonias, se lleva a cabo la identificación mediante pruebas bioquímicas.

El estudio bioquímico que selleva a cabo como complemento de otros estudios bacteriológicos es posible gracias a las reacciones fisiológicas y químicas que llevan a cabo los microorganismos. Para esto se emplean medios de cultivo enriquecidos con productos útiles para el metabolismo celular, los cuales además contienen algún indicador que hace cambiar el color del medio al efectuar dichos microorganismos sus funciones.Los organismos varían en su capacidad para utilizar diferentes compuestos ( por ejemplo: carbohidratos, urea, citrato, etc.) para algunos microorganismos que se usan en su identificación en el laboratorio.
De acuerdo a los productos de su actividad química, las bacterias se pueden clasificar como:
1. Zimógenas: las que fermentan los carbohidratos, desdoblándolos en alcohol, ácido láctico oacético.
2. Aerógenas: las que producen gas como hidrógeno y dióxido de carbono como resultado de su actividad metabólica.
3. Anaerógenas: las que no producen cantidades visibles de gas durante su actividad metabólica.
4. Cromógenas: las que producen pigmentos solubles o insolubles.
5. Fotógenas: las que causan putrefacción y producen una débil fosforescencia (algunas bacterias marinas)Las pruebas bioquímicas son un conjunto de reacciones basadas en el metabolismo de los microorganismos que generalmente se realizan en sistemas miniaturizados y automáticos. Entre otros aspectos, se analiza la acción de la bacteria sobre los hidratos de carbono, la liberación de enzimas y metabolitos al medio de cultivo etc. A partir del conocimiento del metabolismo, las pruebas bioquímicas nospermiten determinar el género y la especie de la bacteria en estudio.
Entre las pruebas bioquímicas más comunes tenemos:
Caldos de carbohidratos con indicador de pH, rojo de fenol: Al fermentar algunos carbohidratos, muchas bacterias producirán ácido, y con un medio con pH original alrededor de 7.4 al bajar éste a 6.8 por el ácido que produce un cambio de color gracias a la incorporaciónde un indicador de pH como es el rojo de fenol.

Kligler Hierro Agar
La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables.
El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro.
El rojo de fenoles el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.
El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Resultados* Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
* Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
* Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
* La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica...