pruebas bioquimicas

Prueba del citrato sódico:

Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como única fuente de carbono y sales amónicas inorgánicas como única fuente de nitrógeno, provocando la alcalinización del medio.
El medio a utilizar es agar Citrato de Simons, que contiene citrato de sodio, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador de pH.Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con el metabolismo del citrato, generará una fuerte basificación del medio que será aparente por un cambio de color del mismo de verde a azul.
Simmons Citrato Agar es un medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias,
En el medio de cultivo las sales de fosfatoforman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino.
• Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
• Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.
MicroorganismoCitrato permeasa Color del medio
Klebsiella pneumoniae Positivo Azul
S. typhimurium Positivo Azul
E. coli Negativo Verde
S. flexneri Negativo Verde


Prueba de indol:

Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de las bacterias para producir indol a partir del triptófano. El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminación reductiva del triptófano y esta reacción esllevada a cabo por algunas bacterias que poseen las enzimas denominadas en su conjunto triptofanasas.
Para detectar la producción de indol se utiliza el medio Caldo triptófano y la lectura de la prueba se realiza con el reactivo de Kovacs (alcohol isoamilo, p-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico concentrado).
El medio de cultivo líquido se inocula introduciendo en él una carga debacterias de la cepa en estudio mediante el asa bacteriológica. Se incuba a 37ºC durante 24 horas y tras la incubación, añadimos unas gotas de reactivo de Kovacs.
Si se ha producido indol aparecerá un anillo rosa fucsia en la superficie del caldo de cultivo.

• Positivo: color rojo en la interfase del reactivo y el medio de cultivo.
• Negativo: el color del reactivo revelador permaneceincoloro-amarillento.

Prueba del rojo de metilo:

Evalúa la capacidad de la bacteria de utilizar la glucosa por la vía ácido mixta o por la vía del butilenglicol.
Las bacterias que utilizan la glucosa por la vía ácido mixta generan como productos finales ácido acético, ácido fórmico, ácido succínico y ácido láctico, los cuales provoca un fuerte descenso en el pH del medio, el cual se detecta al añadir elrevelador: rojo de metilo, que vira el medio a rojo a pH menor a 4,4 y lo mantiene amarillo si el pH es mayor a 5,1.
En esta prueba se utiliza el medio MR-VP. En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.

• Positivo: color rojo.
• Negativo: color amarillo.

Microorganismo CrecimientoRM VP
E. coli Bueno + -
K. pneumoniae Bueno - +
P. mirabilis Bueno + -
S. typhimurium Bueno + -
Citrobacter freundii Bueno + -
Enterobacter aerogenes Bueno - +


Prueba de Voges-Proskauer:

Las bacterias que utilizan la glucosa por la vía del butilenglicol generan productos finales neutros como el butanodiol y el etanol, produciéndose etanoína como intermediario, y el cual sedetecta cuando se añaden al medio los reveladores KOH al 40% y alfanaftol, que reaccionan con este compuesto produciendo un color rojo (bacterias Vogues Prokauer positivas). Si las bacterias no utilizan la glucosa por esta vía el medio permanece amarillo después de agregar los reveladores ( bacterias Vogues Prokauer negativas).
En esta prueba se utiliza el medio MR-VP.
La aparición de un color...