Pruebas bioquimicas

Pruebas Bioquímicas
INTRODUCCIÓN Con frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de manera detallada su actividad bioquímica, porque otras características no son suficientemente distintivas o diferenciales.
En el laboratorio disponemos de numerosas técnicas para la caracterización bioquímica de una especie. Además de los productos finales de los procesos metabólicos,también se necesita conocer con detalle como se producen estos cambios, como ocurren paso a paso las reacciones químicas, cuáles enzimas intervienen, cuales son los productos intermediarios además de que se deben reconstruir las secuencias de las reacciones bioquímicas que tienen lugar dentro de la célula. En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia nutritiva específicao sustrato y después de la incubación del cultivo se examina para ver los cambios químicos que hayan ocurrido. Enterotube II
Kligler Hierro Agar Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa y lactosa, y a la producción de ácido sulfhídrico. Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Peptonade carne 13.0 Cloruro de sodio 5.0 Suspender 54.8 g del polvo por litro de Lactosa 10.0 agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 Tripteina 10.0 minutos hasta disolución total. Llenar Glucosa 1.0 hasta la tercera parte de los tubos de Citrato de hierro y amonio 0.5 ensayo. Esterilizar a 121 C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta Tiosulfato de sodio 0.3profundo. Rojo de fenol 0.025 Agar 15.0 pH final: 7.3 0.2
Fundamento •En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. •La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. •El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de ionesFe 3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. •El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. • Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. •El tiosulfatode sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Resultados 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa. 3-Pico alcalino/fondo alcalino(pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares. 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Características del medio Medio preparado: rojo
TSI Agar Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, enbase a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico. Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Extracto de carne 3.0 Pluripeptona 20.0 Cloruro de sodio 5.0 Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y Lactosa 10.0 calentar con agitación frecuente, Sacarosa 10.0 hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la terceraparte de Glucosa 1.0 los tubos de ensayo. Esterilizar a Sulfato de hierro y amonio 0.2 121 C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo. Tiosulfato de sodio 0.2 Rojo de fenol 0.025 Agar 13.0 pH final: 7.3 0.2
Fundamento En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los...