Pruebas Bioquimicas

10/3/2008

T.P.
T
P Nº 5
Pruebas Bioquímicas
q

1

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l ió de
d cepas que comparten
t propiedades
i d d estables
t bl y difieren
difi
Especie bacteriana: colección
significativamente de otros grupos de cepas.

Asociación DNA-DNA (>70%)
Porcentaje de similitud rRNA 16S (>97%)

IDENTIFICACION DE UN MICROORGANISMO

Pruebas bioquímicas:

Ensayos que ponen de manifiesto característicasmetabólicas
de los microorganismos.

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Catalasa
Oxidasa
Hidrólisis de almidón
Motilidad
Sensibilidad a antibióticos
IMViC
Agar Hierro-Dos azúcares de Kligler
API 20E

Pruebas bioquímicas para la
identificación de
enterobacterias

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Prueba de la Oxidasa
(citocromo C oxidasa)

Vibrio
Aeromonas
Pseudomonas

Escherichia coli

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Prueba de la Oxidasa
(citocromo Coxidasa)

Se utiliza un donor de
electrones artificial (tetrametil(tetrametil
p-fenilenediamina).

Reacción +

Reacción -

Vibrio
Aeromonas
Pseudomonas

Enterobacterias

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Prueba de la Catalasa
Peróxido
ó i de hidrógeno
i ó

Radical hidroxilo

Compuesto producido en pequeñas cantidades
durante la respiración aeróbica. Su producción
está mediada por flavoproteínas.

Radical libre altamentereactivo. Agente
oxidante capaz de atacar cualquier molécula
orgánica presente en la célula.

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Prueba de la Catalasa
Enzimas que actúan sobre
los derivados tóxicos del
oxígeno:

Catalasa

Peroxidasa

Enzimas que destruyen el peróxido de
hidrógeno.

Superóxido dismutasa

Enzima que destruye el anión
superóxido
p
(
)).

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Prueba de la Catalasa

-

+

Reacción +
Ensayo:
Setoman bacterias de un cultivo
sólido y se esparcen con ansa sobre
una gota de peróxido de hidrógeno
30%.

Aerobios estrictos o
facultativos

Bacillus
Staphylococcus
Enterobacterias

Reacción - Clostridium

S
Streptococcus

Anaerobios estrictos o
Lactobacillus
microaerófilos

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Hidrólisis de almidón
( )
α-amilasa:
α
amilasa: Enzima qque hidroliza los enlaces α(1-4)
de polímeros deglucosa.

-

+
Reacción +
(Halo transparente)

Agregado de
Lugol

B ill
Bacillus

Agar - almidón

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Motilidad
Se detecta la presencia de flagelo bacteriano.

Se cultivan las bacterias por punción en
placas de agar blando.
Se observa migración como un halo desde
el punto de siembra.

Bacterias móviles

Bacterias no móviles

Pseudomonas
Bacillus
Enterobacter
Vibrio

Staphylococcus

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Sensibilidad a antibióticos
Mecanismos de acción
Inhibición de la síntesis de la pared (Penicilina, Ampicilina, Carbenicilina,
Cefalosporinas, Vancomicina, etc.)
Inhibición de la síntesis de proteínas (Streptomicina, Gentamicina,
Cloranfenicol, Tetraciclina, etc.)
Inhibición de la sínteis de ácidos nucléicos (Ciprofloxacina, Rifampicina, etc.)
Disrupción de la membrana (Polimixina B)Antagonistas metabólicos (Sulfonamida, Trimetoprima)

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Sensibilidad a antibióticos

MIC (concentración inhibitoria mínima)
Análisis de
sensibilidad a
antibióticos

MLC (concentración letal mínima)
Análisis de difusión en agar
(sistema de discos)

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Sensibilidad a antibióticos
Metodología de trabajo:
Se crecen cultivos en medio líquido.
Se mezcla el cultivo con agar blando(0,7%) y se vuelca sobre una placa de agar nutritivo.
Se depositan discos con diferentes antibióticos.
Se mide el diametro del halo de inhibición.

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Pruebas bioquimicas para la
identificación de Enterobacterias
Cocobacilos Gram negativos
Aerobios facultativos (Catalasa positivos)
Fermentadores de Glucosa
Oxidasa negativos

1) IMViC
a)) Prueba del Indol
b) Rojo Metilo
c) Voges Proskauerd) Prueba del citrato

2) Agar Hierro Dos Azúcares de Kligler

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1)) IMViC
a) Prueba del Indol
Indol: Subproducto de la degradación del aminoácido Triptofano
por la enzima triptofanasa.

Cultivar la bacteria en caldo de peptonas
(alto contenido de Triptofano ) por 48 h.

Reacción –

Reacción +

Formación de una fase Formación de una fase
orgánica amarilla
orgánica roja

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