Pruebas Imvic

MODULO: ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS
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TÍTULO PRUEBAS BIOQUÍMICAS IMViC

OBJETIVO/S

• Aprender a sembrar microorganismos en medios sólidos y líquidos en tubo a partir de cultivos en placas empleando asa de siembra y en condiciones asépticas.
• Empleo de la estufa paraincubación a 37 ºC y en condiciones de aerobiosis durante 24-48 horas.
• Aprender a realizar las pruebas bioquímicas IMVIC para la detección de bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae.
• Aprender a interpretar los resultados de las pruebas anteriores.


ESQUEMA PROCEDIMIENTO

El microorganismo empleado para la realización de las pruebas bioquímicas IMViC deidentificación es Klebsiella pneumoniae, una especie perteneciente a la familia Enterobacteriaceae.






PRUEBA DEL INDOL














PRUEBA DEL ROJO METILO










VOGES PROSKAUER













PRUEBA DEL CITRATO













FUNDAMENTO

Las pruebas IMViC consisten en una batería de 4 pruebas bioquímicas de identificación bacteriana, que serealizan de una en una sobre 4 medios de cultivo diferentes sembrados con microorganismos pero que deben interpretarse conjuntamente para obtener un resultado certero en la identificación de bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae.
El microorganismo objeto de estudio se siembra en un tubo que contiene el medio de cultivo estéril, líquido o sólido y de diferente composición según laprueba de identificación que vayamos a realizar sobre él.

PRUEBA DEL INDOL (I)

Permite la identificación de Enterobacterias a partir del estudio de su metabolismo proteico, poniendo de manifiesto la degradación del triptófano (presente en el medio de cultivo empleado: agua de peptona) por medio de la enzima intracelular triptofanasa (presente en alguno géneros de bacterias de esta familia) ysu capacidad para formar indol a partir de éste aminoácido. La adición al medio del reactivo indol de Kovacs (paradimetilaminobenzaldenido) permite poner de manifiesto la presencia del indol formado, pues al reaccionar con él da lugar a un anillo rosa fucsia-rojo en la parte superior del medio de cultivo.
El microorganismo estudiado debe sembrarse en un medio de cultivo líquido no selectivodenominado agua de peptona (composición: peptona, que proporciona los nutrientes, NaCl, que proporciona el ambiente osmótico adecuado, y difosfato potásico que actúa como tampón para amortiguar las variaciones de pH producidas por el crecimiento bacteriano). Este medio, por un lado, favorece el crecimiento de Enterobacterias, y por otro, proporciona el triptófano necesario para la prueba. Además, nocontiene glucosa, que podría ser metabolizada por los microorganismos del medio (fermentación) a ácidos, reduciendo y el pH del medio e inhibiendo la acción de la triptofanasa (actúa a pH neutro).
El reactivo de Kovacs es de color amarillo y debe ser fresco, para evitar que pierda sus propiedades y su color original (pasa a marrón). Puede conservarse en nevera, en frasco color topacio cerradoherméticamente.

PRUEBA DEL ROJO DE METILO (M)

Permite identificar determinados géneros de bacterias de la familia Enterobacteriaceae anaerobias facultativas, que obtienen la energía a través de la fermentación ácido mixta de los hidratos de carbono, produciéndose ácidos como productos finales que provocan un fuerte descenso de pH en el medio de cultivo. Si las bacterias que han crecido en elcultivo fermentan la glucosa (presente en el medio de cultivo) a través de la vía ácido-láctica, la acidificación del medio debido a los productos finales de este metabolismo puede ponerse de manifiesto por el cambio de color (de amarillo a rojo) del reactivo rojo de metilo añadido. El rojo de metilo es un indicador ácido base, que presenta color amarillo a pH superior a 5,1 y vira a color rojo...