PRÁCTICA 1 BIOQUÍMICA PRECPITACIÓN SEPARACIÓN Y PI



INTRODUCCIÓN:
Las proteínas son polímeros biológicos, componentes principalmente de las células animales y vegetales son biomacromoléculas unidas y conformadas por una cadena larga de aminoácidos (más de 50 de ellos) unidos por un enlace peptídico.
Los aminoácidos son compuestos orgánicos que contienen un grupo amino y grupos carboxilo, por tanto poseen propiedadesácidas y básicas. En la naturaleza se encuentran solo 20 de las principales aminoácidos, casi todos son α-aminoácidos, esto es que su grupo amino está presente en el átomo de carbono α.
Antes de iniciar el estudio de una proteína, es necesario que esta se encuentre pura, sin contaminación, con otras proteínas u otras sustancias celulares, por esta razón es importante separar las proteínas de los demáscompuestos, en este caso tenemos: bajar la solubilidad de proteínas con sales como el sulfato de amonio, reaccionando con metales o aniones de ácidos, cambio de temperatura, por trabajo mecánico, cambios de pH, entre otros. Existe un pH donde la carga eléctrica media de una proteína es cero, este pH se llama punto isoeléctrico (pI), en este punto de pH la molécula se disocia por igual en ambossentidos y las proteínas presentan en este punto máxima viscosidad y baja solubilidad.
OBJETIVOS:
1. Observar, comprobar y analizar los distintos factores fisicoquímicos que afectan a la solubilidad de las proteínas
2.- Por medio de la insulina observar el punto isoeléctrico y los cambios que produce en una proteína al cambiar el pH.
RESULTADOS:
Al efectuar la práctica con sus distintasexperiencias estos son los resultados obtenidos.
I. Separación de Proteínas por precipitación con sales

BIURET
FILTRADO 1
Color morado (+)
PRECIPITADO 1
Color morado (+)
FILTRADO 2
Color azul (-)
PRECIPITADO 2
Color violeta (+)
TABLA1. RESULTADOS DEL SALTING-OUT DE LA CLARA DE HUEVO
II. Precipitación por efecto de pH y de solventes.
TUBO
RESULTADO
Clara con HCl 0.1N
Se formó un precipitado blanco y muyopalescente el tubo completamente
Clara con NaOH 0.1 N
El tubo es claro, pero no precipito, se veía poco opalescente
Clara con regulador de acetatos 0.1M pH 4.7
Se forma un precipitado blanco, con una mayor turbidez y mayor número de partículas suspendidas
TABLA 2. RESULTADOS DEL CAMBIO DE pH EN LA CLARA DE HUEVO
III. Precipitación por metales pesados
TUBO
OBSERVACIONES
Clara con cloruro mercúricoEl tubo se puso completamente blanco y turbio
Clara con Nitrato de Plata
Se formó un precipitado blanco
Clara con Acetato de Plomo
Se tornó turbio el tubo, totalmente blanco
Clara con cloruro de Bario
No se llevó a cabo
Clara con cloruro de sodio
Se ve opalescente el tubo
Clara con Agua
Opalescente en mayor proporción que el anterior tubo
TABAL 3. Resultados de los tubos con metales pesados
IV.Determinación del punto Isoeléctrico de la Insulina
TUBO
OBSERVACION
1
Tubo color claro, no hubo gran cambio en la insulina
2
Tubo color claro, no se presentaron cambios
3
Tubo color claro y sin turbidez, sigue sin presentar cambio
4
Tubo color claro comienza a verse un poco de viscosidad en la insulina
5
Precipitó completamente formando la insulina una capa viscosa.
TABLA 4. Resultados del puntoisoeléctrico de la insulina
DISCUSIÓN DE RESULTADOS:
I. Separación de Proteínas por precipitación con Sales
Al mirar la tabla 1, nos dimos cuenta que el único tubo donde la prueba de biuret dio negativa fue en el tubo del filtrado 2, recordemos que la prueba de biuret solo da positivo con polipéptidos, es decir cadenas de aminoácidos con más de 3 enlaces peptídicos hasta una proteína, entoncesconcluimos con la prueba de biuret que en el filtrado 2 ya habíamos filtrado y separado todas las proteínas que contenía nuestra clara de huevo, esto se pudo ver fácilmente por el cambio de color formado por el compuesto de coordinación con el cobre y los aminos libres de los enlaces peptídicos, recordando que al agregar sales la fuerza iónica de sales hace que disminuya la solubilidad de las...