Práctica 7. Tinciones Selectivas.

Práctica Nº 7

TINCIONES SELECTIVAS

Objetivos:

Que el alumno:

1. Observe estructuras especiales, como las endosporas y cápsulas con tinciones selectivas.
2. Comprenda la importancia que tienen estas tinciones para la caracterización e identificación de las bacterias.

Introducción:

Varios microrganismos contienen una cubierta gelatinosa llamada capsula.
La tinción de lacapsula es mas difícil que otros tipos de procedimientos de tinción por que los materiales capsulares son hidrosolubles y pueden desprenderse o eliminarse durante los lavados rigurosos. Para demostrar la presencia de capsulas el biólogo puede mesclar varias bacterias en una solución que contenga una suspensión coloidal fin de partículas coloreadas (por lo general tinta china o nigrosina) queproporcione un fondo que contraste y luego teñir las bacterias con un colorante. Debido a su composición química la capsula no acepta la mayoría de los colorantes biológicos, como la safranina, y así aparecen como halos que rodean cada célula bacteriana teñida (Tortora, 2007).
Tinción de endosporas (ESPORAS)
Una endospora es una estructura especial, resistente y latente que se forma dentro de unacélula y protege a una bacteria de condiciones ambientales adversas.
Las esporas no se tiñen con los métodos comunes, como la tinción simple o la tinción de Gram, por que estos colorantes no atraviesan sus paredes.
La mas utilizada para este fin es la tinción de Schaffer-fulton para endosporas. Se aplica colorante primario verde de maquita a un extendido fijado con calor y se calienta hasta laemicion de vapores durante alrededor de 5 minutos. El calor ayuda a que el colorante atraviese la pared de la endospora. Luego se lava el preparado con agua durante 30 segundos para eliminar el verde de maquila de todas las partes de las células salvo las endosporas. A continuación se aplica sobre el extendido se aplica safranina un colorante para teñir las porciones de la célula distintas de lasendosporas. En un extendido preparado adecuadamente las endosporas aparecen verdes dentro de las células rojas o rosadas. Como las endosporas presentan un índice de refracción alto se las peude detectar en el microscopio óptico cuando no están teñidas pero no se las puede diferenciar de las inclusiones de material reserva sin unta tinción especial (Clavell, 1992).

Material y reactivos:

Cultivosde cepas bacterianas (Bacillus subtilis y Klebsiella sp.)
1 Vaso de precipitado de 100 mL
1 Parrilla de calentamiento
1 Mechero
6 portaobjetos
Agua destilada
Safranina
Verde de malaquita
Tinta china
Aceite de inmersión
Microscopio óptico

Procedimiento:

Tinción selectiva de endosporas

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d) Muestra con verde de malaquita sobre agua en ebullición. | e) Muestra enjuagada.Adición de safranina. |

Tinción negativa para observación de cápsulas

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Portaobjetos con extensión de tinta china y Klebsiella sp. |

Resultados:

Tinción selectiva de endosporas

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Endosporas de Bacillus sibtilis vistas a 100x | Endosporas de Bacillus sibtilis vistas a 100x |

Aquí se observó la presencia de estructuras de resistencia tales como la endospora del organismoBacillus subtilis, las endosporas están teñidas de color verde, mientras que los restos celulares sobrantes de la esporulación presentan un color rosado/rojo.

Tinción negativa para observación de capsulas

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Capsulas de Klebsiella sp. observadas a 40x | Capsulas de Klebsiella sp. observadas a 100x |

En las fotografías se pueden observar las capsulas producidas por la Klebsiella sp.,se presentan como puntos brillantes, con un perfil refringente. Da la apariencia de un cielo nocturno lleno de estrellas.

Cuestionario
1. ¿Qué función tienen las endosporas en las bacterias?
Son estructuras protectoras, de resistencia. Se forma dentro de la bacteria y contienen material genético y unas cuantas enzimas encerradas dentro de una gruesa capa protectora. Su actividad...