Práctica.Investigación de Estreptococos fecales

PRÁCTICA 8.Investigación de Estreptococos fecales

Fundamento:
Determinar la presencia de STREPTOCOCCUS faecalis en una muestra de carne picada de ave. La muestra ha sido contaminada conSTREPTOCOCCUS faecalis procedentes de la filtración de aguas residuales.
Medios de cultivo:
Agua de peptona
Caldo EVA (Azida y violeta de etilo)
Agar selectivo: SLANETZ-BARTLEY (distribuir enplacas. No esterilizar en autoclave)
Procedimiento:
Pesar 10g de la muestra
Homogeneizar en el estomacher añadiendo agua de peptona (90ml para una dilución 1/10)


Filtrar congasa estéril a un matraz Erlenmeyer

A partir de la solución matriz, realizar diluciones seriadas con agua de peptona. Distribuir en tubos 9ml.Prueba presuntiva:
De cada uno de los tubos anteriores, se siembra 1ml a otro tubo que contiene 9ml de caldo EVA. Todos los tubos se incuban 24/48h a 44ºC.
Resultado: Los tubos con mayorconcentración presentan un precipitado azul en el fondo.


Pruebas confirmativas:
De los tubos + (caldo EVA) se toman 0.1ml y se siembran en placas de agarSlanetz-Bartley, extendiendo el inóculo con el asa de Digrasky. Se llevan las placas a incubar 24h a 44ºC.

Resultado: De las dos placas sembradas solo hay crecimiento en la 10-4 , las colonias sonpequeñas, redondas y rojizas.

Otras pruebas confirmativas:
Tinción Gram:

Resultado: Se observan cocos Gram+ formando cadenas.
Catalasa:Resultado: No hay aparición de burbujas. Catalasa-
Oxidasa:
Resultado: No hay cambio de color. Oxidasa-
Bilis esculina: Siembra en estría e incubación a 37oC/ 24h
Inicio finalResultado: Ennegrecimiento del medio con formación de halo marrón alrededor de la colonia. Esto indica que la bacteria es capaz de hidrolizar la esculina en presencia de bilis con producción de...