Prácticas Laboratorio Microbiología

PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA

MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo han de cubrir todas las necesidades nutricionales del organismo que deseamos cultivar. Los distintos medios de cultivo se pueden clasificar atendiendo a muy diversas consideraciones:

Medios sólidos: contienen agar.
Medios líquidos: carecen de agente solidificante.
Medios complejos: no se conoce la composiciónquímica exacta del medio.
Medios sintéticos: son medios de composición química definida.
Medios selectivos: son medios adecuados para el crecimiento y la identificación de microorganismos específicos.
Medios test: se utilizan para la realización de pruebas bioquímicas.
Medios de enriquecimiento: favorecen el crecimiento de determinados microorganismos.

En la práctica 1 nosencargamos de preparar los distintos medios de cultivo con los que vamos a trabajar en las siguientes sesiones. Para prepararlos sólo tenemos que seguir la “receta” que nos proporciona el guión. Debemos tener en cuenta que a todos aquellos medios que lleven algún tipo de suplemento, éste se añadirá tras autoclavar y enfriar a 60ºC, ya que si no fuera así, el suplemento podría degradarse y por tanto notendría efecto a la hora de cultivar.

Los medios que preparamos son:
a) Medio KF: contiene lactosa y maltosa fermentable, azida sódica y un 1% de TTC.
Las sales de tetrazolio se usan para medir actividad respiratoria asociada a una cadena de transporte de ē. La reducción de una sal de tetrazolio causa la formación de un precipitado insoluble de coloración roja intensa llamado formazán.

Laazida sódica se usa como agente selectivo en medios de cultivo para detectar enterococos fecales junto con la kanamicina. Los enterococos fecales son resistentes tanto a azida como a kanamicina.

Este medios se utiliza para averiguar si existen enterococos fecales en nuestra muestra. Los enterococos fecales son Gam +, aerobios o anaerobios facultativos y catalasa negativos. Fermentan la glucosacon producción de ácido.

b) Medio Kliger: contiene sulfato ferroso como indicador de la formación de H2S, un indicador de pH, glucosa, lactosa y sacarosa. Se utiliza como medio inclinado y sirve para la valoración de 3 parámetros:
1. Superfície inclinada: sirve para la valoración de la lactosa o la sacarosa. Si el organismo es capaz de oxidar lactosa, la superfície inclinada del tubovirará a amarillo debido a la formación de ácidos.
2. Profundidad: los bacilos fermentadores de la glucosa forman suficiente ácido para que el medio tome un color amarillo en la profundidad o medio entubado, relativamente anaerobio, pero no en la superfície inclinada. La formación de gases es característica en estas condiciones, lo que hace que puedan aparecer burbujas e incluso que puedadesplazarse el medio hacia la salida del tubo.
3. H2S: en caso de haber bacilos productores de este gas, el fondo del tubo virará a gris oscuro, donde también podrán aparecer burbujas de gas.

Citrato de Simmons: medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónicoes la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano.
Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el Mg es el cofactor enzimático. El NaCl mantiene el balance osmótico y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira a azul eléctrico en medio alcalino.
El medio de cultivo es diferencial enbase a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente produccion de alcalinidad.

El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da , progresivamente, oxalacetato y...