punto isielectrico
Páginas: 6 (1253 palabras)
Publicado: 5 de febrero de 2014
Discusión de Resultados:
Cuando se alcanza el punto isoeléctrico de la caseína se neutralizan sus cargas, lo cual impide que esta proteína interactue con las demás moléculas presentes en la solución. Al no interactuar con alguna otra molécula, la proteína termina precipitándose, lo que hace fácil su aislamiento del resto de la solución. Pero en este punto es importante considerar que la caseínaes la única proteína de la leche que alcanza su punto isoeléctrico a un pH de 4.8, lo que garantiza que es la única proteína que se está aislando.
Conclusiones:
Conociendo el punto isoeléctrico de una determinada molécula anfotérica, es posible aislarla. Por lo que alcanzando el punto isoeléctrico de la caseína, esta se precipita, lo que hace posible su aislamiento del resto de la leche.RÁCTICA 2: PRECIPITACIÓN ISOELÉCTRICA DE LA CASEÍNA DE LA LECHE
¿CÓMO AISLAR UNA PROTEÍNA?
En una célula hay muchas proteínas, para poder estudiarlas, es necesario contar con una muestra homogénea que sólo contenga moléculas de un mismo tipo.
En general las técnicas de separación se basan en:
• El tamaño
• La carga
• La polaridad
Mientras más simple sea lacomposición de la proteína en cuestión, y más enriquecida este en la célula, mayores son las posibilidades de éxito de la purificación.
El primer paso implica la ruptura de las células. Esto puede efectuarse con diversas técnicas. El más sencillo es moler el tejido en una licuadora con un amortiguador apropiado. Las células se rompen y liberan proteínas solubles. El proceso también rompemuchos orgánulos celulares.
El segundo paso corresponde al método de purificación, que dependerá de la característica tomada en cuenta. Ejemplos de algunas técnicas de purificación:
• Cromatografía liquida de intercambio iónico.
• Cromatografía liquida por filtración en geles.
• Separación por geles de poliacrilaminada en presencia de detergentes.
• Electroenfoque en geles de poliacrilamida.• Cromatografía liquida por afinidad.
• Ultrafiltración utilizando filtros y/o matrices sintéticas.
• Cromatografía liquida de alta resolución (HPLC).
• Precipitación selectiva.
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA CASEÍNA
La caseína representa cerca del 77% al 82% de las proteínas presentes en la leche.
Las moléculas individuales de caseína se caracterizan en general por tener un tamañomediano (200 aminoácidos), contar con un número alto de residuos de prolina que cusa un especial plegamiento en la cadena de proteína e inhibe la formación de una fuerte y ordenada estructura secundaria. La caseína no contiene puentes di sulfuro.
La falta de organización de las moléculas de caseína ha hecho que hasta el momento ninguna haya podido cristalizarse para llevar a cabo estudios detalladosde su estructura secundaria y terciaria.
Una propiedad clásica, que ha servido durante un siglo para su definición operacional, es que las caseínas precipitan a pH de 4.6.
PUNTO ISOELÉCTRICO
Todas las macromoléculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se dispersan en agua. Una característica de las proteínas y otros biopolímeros es que la carga total que adquieren dependedel pH del medio.
Así, todas las proteínas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el que se encuentren y de los aminoácidos que la componen, así como de las cargas de cualquier ligando que se encuentre unido a la proteína de forma covalente (irreversible).
Debido a la composición en aminoácidos de la proteína, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pHdel medio: catiónicos, neutros y aniónicos.
Cualquier proteína tendría una carga neta positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente ácido debido a que los grupos COOH de los aminoácidos aspártico y glutámico estarían en su forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lysina estarían protonados (-NH3+).
De igual forma si la proteína se encuentra en un medio con un pH muy alto...
Cuando se alcanza el punto isoeléctrico de la caseína se neutralizan sus cargas, lo cual impide que esta proteína interactue con las demás moléculas presentes en la solución. Al no interactuar con alguna otra molécula, la proteína termina precipitándose, lo que hace fácil su aislamiento del resto de la solución. Pero en este punto es importante considerar que la caseínaes la única proteína de la leche que alcanza su punto isoeléctrico a un pH de 4.8, lo que garantiza que es la única proteína que se está aislando.
Conclusiones:
Conociendo el punto isoeléctrico de una determinada molécula anfotérica, es posible aislarla. Por lo que alcanzando el punto isoeléctrico de la caseína, esta se precipita, lo que hace posible su aislamiento del resto de la leche.RÁCTICA 2: PRECIPITACIÓN ISOELÉCTRICA DE LA CASEÍNA DE LA LECHE
¿CÓMO AISLAR UNA PROTEÍNA?
En una célula hay muchas proteínas, para poder estudiarlas, es necesario contar con una muestra homogénea que sólo contenga moléculas de un mismo tipo.
En general las técnicas de separación se basan en:
• El tamaño
• La carga
• La polaridad
Mientras más simple sea lacomposición de la proteína en cuestión, y más enriquecida este en la célula, mayores son las posibilidades de éxito de la purificación.
El primer paso implica la ruptura de las células. Esto puede efectuarse con diversas técnicas. El más sencillo es moler el tejido en una licuadora con un amortiguador apropiado. Las células se rompen y liberan proteínas solubles. El proceso también rompemuchos orgánulos celulares.
El segundo paso corresponde al método de purificación, que dependerá de la característica tomada en cuenta. Ejemplos de algunas técnicas de purificación:
• Cromatografía liquida de intercambio iónico.
• Cromatografía liquida por filtración en geles.
• Separación por geles de poliacrilaminada en presencia de detergentes.
• Electroenfoque en geles de poliacrilamida.• Cromatografía liquida por afinidad.
• Ultrafiltración utilizando filtros y/o matrices sintéticas.
• Cromatografía liquida de alta resolución (HPLC).
• Precipitación selectiva.
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA CASEÍNA
La caseína representa cerca del 77% al 82% de las proteínas presentes en la leche.
Las moléculas individuales de caseína se caracterizan en general por tener un tamañomediano (200 aminoácidos), contar con un número alto de residuos de prolina que cusa un especial plegamiento en la cadena de proteína e inhibe la formación de una fuerte y ordenada estructura secundaria. La caseína no contiene puentes di sulfuro.
La falta de organización de las moléculas de caseína ha hecho que hasta el momento ninguna haya podido cristalizarse para llevar a cabo estudios detalladosde su estructura secundaria y terciaria.
Una propiedad clásica, que ha servido durante un siglo para su definición operacional, es que las caseínas precipitan a pH de 4.6.
PUNTO ISOELÉCTRICO
Todas las macromoléculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se dispersan en agua. Una característica de las proteínas y otros biopolímeros es que la carga total que adquieren dependedel pH del medio.
Así, todas las proteínas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el que se encuentren y de los aminoácidos que la componen, así como de las cargas de cualquier ligando que se encuentre unido a la proteína de forma covalente (irreversible).
Debido a la composición en aminoácidos de la proteína, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pHdel medio: catiónicos, neutros y aniónicos.
Cualquier proteína tendría una carga neta positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente ácido debido a que los grupos COOH de los aminoácidos aspártico y glutámico estarían en su forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lysina estarían protonados (-NH3+).
De igual forma si la proteína se encuentra en un medio con un pH muy alto...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.