Purificación de enzimas

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

PRACTICAS DE LABORATORIO IDENTIFICACION BACTERIANA
Maye Bernal Rivera Profesora Asistente

Introducción Para establecer el Diagnóstico Etiológico de la Enfermedad Infecciosa, hay que partir de una muestra clínica procedente del paciente en estudio, para ser procesado en el Laboratorio Clínico, dependiendodel Diagnóstico Presuntivo consignado en la Orden de Solicitud expedida por el médico tratante. Para realizar la Identificación Bacteriana la muestra del paciente se siembra en diferentes medios de cultivo, en condiciones ambientales específicas, dependiendo del microorganismo que se pretenda aislar. Esta primera parte del módulo de Bacteriología corresponde a la identificación del microorganismo(género y especie) la cual conlleva a establecer el Diagnóstico Etiológico. Medios de Cultivo Definición: Medio de Cultivo es el conjunto de nutrientes y sustratos que permiten el crecimiento la multiplicación y el aislamiento de las diferentes especies bacterianas para llegar a su identificación y otros estudios complementarios, tales como su comportamiento frente a los antimicrobianos. Un mediode cultivo mínimo debe tener: agua, una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno y una sal para mantener estable la concentración de iones. Clasificación Los medios de cultivo se clasifican de acuerdo a: Origen - Naturales - Sintéticos Consistencia - Líquidos - Sólidos - Semi-sólidos Composición - Nutritivos - Enriquecidos - Selectivos - Diferenciales

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Medios de Transporte Sonaquellos que aseguran la viabilidad de la bacteria desde el momento de la toma de la muestra hasta su llegada y procesamiento en el Laboratorio. Carecen de un nutriente mínimo indispensable, evitando así el crecimiento de las bacterias. Como ejemplo tenemos el medio de Stuart, Ames, Sílica gel, Cary Blair, etc. Medios de Conservación Son medios que permiten mantener la viabilidad de las bacterias,conservando sus características fisiológicas, morfológicas, tintoriales, etc. Los hay para tiempos cortos y tiempos más prolongados, aunque para mantener y garantizar todas las características bacterianas se deben conservar liofilizadas o congeladas a -70ºC o en nitrógeno a -120ºC. . Ejemplos de este tipo de medios son: medio de Dorset, medio de leche descremada triptona glucosa glicerol (LDTGG),solución de Greaves, etc. Para el cultivo de bacterias, además de suministrarles sus requerimientos nutricionales (medios de cultivo óptimos), se les debe proporcionar las condiciones ambientales necesarias para permitirles su crecimiento y multiplicación. Condiciones ambientales - Temperatura - Concentración atmosférica - Presencia de de O2 (Aerobiosis) - Disminución de O2 (Microaerofilia) - Presenciade CO2 (Capnofilia) - Atmósfera de Nitrógeno (Anaerobiosis) - Porcentaje de humedad - Presencia de Luz Selección de Medios Para la recuperación de los microorganismos a partir de las muestras clínicas, es indispensable hacer la selección adecuada de los medios primarios de cultivo para obtener resultados óptimos. Es importante para el medico conocer los diferentes medios utilizados en elLaboratorio Clínico para en un momento dado poder interpretar adecuadamente los resultados y detectar posibles falsos negativos. En el siguiente cuadro se pude ver, dependiendo del agente etiológico en determinada entidad, el medio de cultivo adecuado.

SELECCION DE MEDIOS DE CULTIVO
Entidad Faringitis estreptocócica Uretritis gonocócica Tuberculosis pulmonar Tos ferina
• modificado

AgenteEtiológico Streptococcus pyogenes Neisseria gonorrhoeae Mycobacterium tuberculosis Bordetella pertussis

Medio de Cultivo Agar Sangre Thayer Martin * Ogawa Kudoh Bordet Gengou

Técnicas de Inoculación Las técnicas para inocular las muestras en los diferentes medios de cultivo varían, dependiendo del objetivo. Esterilización del Asa Bacteriológica Las asas bacteriológicas básicamente son alambres...