Purificación y Caracterización De Un Extracelular De La Proteasa Tripsina De Fusarium Oxysporum Var. Lini

Un serineprotease alcalina, capaz de hidrolizar N +-benzoil-DL arginina p-nitroanilida, fue secretada por Fusarium oxysporum var. linin cultivadas en la presencia de gelatina como el nitrógeno yúnica fuente de carbono. La proteasa purificada 65 veces a la homogeneidad electroforética del sobrenadante del cultivo en un procedimiento de tres etapas que comprende QSepharose, cromatografía deafinidad, y sobre una columna de FPLC MonoQ. SDS-PAGE análisis de la proteína purificada se indica una masa molecular estimada de 41 kDa. La proteasa tenían una actividad óptima a una temperatura dereacción de 45 º C y mostró un rápido descenso de la actividad a 48 ° C. El pH optima fue de alrededor de 8,0. Caracterización de la proteasa mostraron que los cationes de Ca y Mg aumentó la actividad,que no fue inhibida por EDTA o 1,10-fenantrolina. La actividad de la enzima en N +-benzoil-DL arginina p-nitroanilida se inhibió 4 - (2-aminoetil)-bencenosulfonilo hidrocloruro de fluoruro,p-aminobenzamidine dihidrocloruro, aprotinina, dichloroisocoumarin 3-4, y N-tosilo-L-lisina, clorometil cetona. La enzima es también inhibida por las concentraciones de sustrato superior a 2,5 x 10 ^ -4 M. Laproteasa tenían una constante de Michaelis-Menten de 0,16 mM y Vmax de 0,60 umol lanzado productos / min / mg de enzima cuando se ensaya de manera no inhibe sunstrate concentración. La actividad de N+-benzoil-DL-arginina p notroanilide fue inhibida competitivamente por p-aminobenzamidine dihydrochoride. Un valor de Kf de 0,04 mm se obtuvo.
Fusarium es un moho no dermatofitos, muy extendida enla naturaleza, tanto en el suelo y en muchas plantas. El género incluye más de 60 especies, de las cuales al menos 10 son agentes de la infección en los seres humanos. F: oxysporum, miliforme F. y F.solani son las especies más frecuentemente aisladas de lesiones humanas. Sin embargo, el interés principal de estos hongos se presenta debido a su capacidad para causar enfermedades en las plantas...